طراحی و کلون کردن microrna-148b در شاتل وکتور لنتی ویروسی

مقدمه: ریزrnaها (mirnas)، rnaهای غیر کد کننده‌ی کوچکی هستند که بیان ژن را از طریق اتصال به mrna هدف تنظیم می‌نمایند. از آن‌جایی که این مولکول‌ها در تکثیر و تمایز سلولی نقش مهمی دارند، می‌توان از آن‌ها در پزشکی ترمیمی استفاده کرد. از میان حاملین مختلفی که برای رها‌سازی این الیگونوکلئوتیدها وجود دارد، سیستم لنتی ویروسی حامل مناسبی به نظر می‌رسد. از طرف دیگر، مشخص شده است که mir-148b در استئوژنز نقش دارد. بدین منظور، در مطالعه حاضر طراحی و کلون کردن microrna-148b در شاتل وکتور لنتی ویروسی مورد بررسی قرار گرفت. روش‌ها: ابتدا پرایمرهای رشته‌های p3 و p5 microrna-148b طراحی گردید و پس از هیبریداسیون، داخل پلاسمید شاتل لنتی ویروسی کلون شد. سپس ورود صحیح قطعه‌ها با استفاده از هضم آنزیمی و توالی‌یابی مورد بررسی قرار گرفت. در ادامه، پس از تولید ذرات لنتی ویروسی مربوط، از آن‌ها برای ترانس‌داکشن سلول‌های بنیادی مزانشیمی استفاده گردید. یافته‌ها: mir-148b-3p/-5p طراحی شده با موفقیت داخل شاتل لنتی ویروسی کلون گردید. یافته‌های حاصل از هضم آنزیمی و توالی‌یابی، موید ورود موفقیت‌آمیز رشته‌های مورد نظر داخل پلاسمید لنتی ویروسی بود. بیان بالای enhanced green fluorescent protein (egfp) نشان دهنده‌ی کارایی بالای ترانس‌فکشن و ترانس‌داکشن بود. نتیجه‌گیری: در مطالعه‌ی حاضر دو نوع ویروس حامل mir-148b3p و mir-148b5p تولید گردید که می‌توانند جهت بررسی فرایند استئوژنز مورد بررسی قرار گیرند.