بیان پروتئین فاکتور 7 انعقادی عملکردی نوترکیب انسانی در سلول‌های پستاندار

مقدمه: فاکتور 7 انعقادی (factor vii یا fvii) یک سرین پروتئاز وابسته به ویتامین k است که نقش محوری در شروع مسیر خارجی آبشار انعقادی دارد. مسیر خارجی آبشار انعقادی، مکانیسم اصلی تشکیل لخته در شرایط فیزیولوژیک بود. نقص مادرزادی فاکتور 7، بیماری خونریزی دهنده‌ی مغلوبی است که به علت جهش‌های ژن f7 ایجاد می‌شود. مصرف فاکتور 7 نوترکیب، به عنوان درمانی برای نقص فاکتور 7 و بیماری‌های هموفیلی می‌باشد. اولین قدم در تولید فاکتور 7 نوترکیب، کلون کردن ژن فاکتور 7 در وکتور بیانی مناسب و در سلول‌هایی است که بتوانند پردازش‌های کارآمدی را بر روی پروتئین بیان شده اعمال کنند.روش‌ها: complementary dna (cdna) کامل ژن f7 انسان به کمک روش real time-polymerase chain reaction (rt-pcr) از سلول‌های liver hepatocellular cells (hepg2) به دست آمد و وارد وکتور بیانی pcdna3.1/neo گردید. سازه‌ی به دست آمده، در سلول‌های chinese hamster ovary (cho-k1) ترانسفکت گردید. پس از ترانسفکشن، به منظور بررسی بیان فاکتور 7، میزان آنتی‌ژن فاکتور 7 به کمک enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) و میزان فعالیت انعقادی به روش one stage pt based در محیط کشت سلول‌های ترانسفکت شده‌ی موقت اندازه‌گیری شد.یافته‌ها: مطالعه‌ی حاضر، نشان داد که فاکتور 7 با موفقیت در سلول‌های cho-k1 بیان شده و دارای فعالیت انعقادی است.نتیجه‌گیری: در این مطالعه، فاکتور 7 نوترکیب با فعالیت انعقادی تولید گردید که حاکی از آن است که وکتور بیانی pcdna3.1/neo برای بیان این پروتئین در سلول‌های پستانداران مناسب است و علاوه بر این، سلول‌های cho-k1 پردازش‌های پس از ترجمه را به درستی بر روی فاکتور 7 انجام می‌دهند و می‌توانند برای تولید فاکتور 7 نوترکیب مورد استفاده قرار گیرند.