طراحی و ساخت واکسن خوراکی مبتنی بر لاکتوکوکوس لاکتیس نوترکیب بیان کننده‌ی پروتئین سیتوپلاسمی لومازین سنتاز علیه بروسلا آبورتوس

مقدمه: واکسیناسیون، یکی از موثرترین و اقتصادی‌ترین روش‌ها برای کنترل بروسلوز می‌باشد. هدف از این پژوهش، ایجاد باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس نوترکیب بیان‌کننده پروتئین سیتوپلاسمی لومازین سنتاز (brucella lumazine synthase) bls بروسلا آبورتوس می‌باشد.روش‌ها: در این مطالعه، وکتور مورد نظر به همراه ژن و سیگنال پپتید (pnz8148-usp45-bls) طراحی و سنتز گردید. به منظور تایید صحت کلونینگ از روش واکشن زنجیره‌ای پلیمراز (polymerase chain reaction) pcr، هضم آنزیمی و توالی‌یابی استفاده شد. سپس وکتور بیانی نوترکیب به باکتری اشریشیاکلی سویه top10 f ترانسفورم شد. باکتری‌های ترانسفورم شده که بر روی پلیت آگار حاوی کلرامفنیکل رشد کرده بودند، انتخاب شده و با استفاده از کیت استخراج پلاسمید ستونی، استخراج انجام شد. با استفاده از تکنیک الکتروپوریشن، وکتور نوترکیب درون باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شد. به منظور تایید ترانسفورماسیون از تکنیک ژل الکتروفورز عمودی (sodium dodecyl-sulfate polyacrylamide gel electrophoresis = sds-page) و (reverse transcription polymerase chain reaction) rt-pcr استفاده شد.یافته‌ها: هضم آنزیم، pcr و توالی‌یابی به منظور تایید کلونینگ ژن bls در وکتور pnz8148 انجام شد. مشاهده‌ی قطعه‌ی ژنیbls  با طولی برابر 477 جفت باز و قطعه پلاسمید pnz8148 - usp45 فاقد قطعه‌ی ژنی bls با طول 2997 جفت باز،کلون‌سازی قطعه‌ی ژنی bls تایید شد. نتایج توالی‌یابی توسط شرکت generay ارسال شد. همچنین در بررسی انجام شده توسط دستگاه نانودراپ غلظت پلاسمید استخراج شده  ng/µl848/9 و درجه‌ی خلوص 2/07 برآورد شد. نتایج حاصل از rt-pcr حاکی از موفقیت در ترانسفورماسیون ژن bls بروسلا آبورتوس در باکتری لاکتوکوکوس لاکتیس بود. نتایج حاصل از sds-page حاکی از وجود تک باند 18 کیلودالتونی پروتئین bls بود.نتیجه‌گیری: پژوهش حاضر نشان داد که ژن bls باکتری پروبیوتیک لاکتوکوکوس لاکتیس ترانسفورم شده با pnz8148-usp45-bls به روش الکتروپوریشن، بیان می‌شود.

design and fabrication of a dna vaccine against brucella abortus based on recombinant lactococcus lactis that expresses lumazine synthase protein

background: vaccination is an efficient and cost-effective way to control brucellosis. this study aims to generate recombinant lactococcus lactis (l. lactis) with brucella abortus (b. abortus) bls cytoplasmic protein.methods: the target vector, gene, and signal peptide (pnz8148-usp45-bls) were developed and made in this study. cloning accuracy was verified by pcr, enzyme digestion, and sequencing. top10 f escherichia coli was transformed using the recombinant expression vector. the column plasmid extraction kit selected and eliminated chloramphenicol-effected bacteria from an agar plate. in electroporation, lactococcus lactis bacteria received the recombinant vector. both sds-page and rt-pcr confirmed the transition.findings: to confirm the correctness of cloning and to confirm the presence of the bls gene in the pnz8148 vector, pcr and enzymatic digestion were performed. observation of the bls gene fragment with a length of 477 bp and plasmid pnz8148 - usp45 without the bls gene fragment with a length of 2997 bp, the cloning of the bls gene fragment was confirmed. also, in the study conducted by the nanodrop device, the concentration of the extracted plasmid was estimated at 848.9 ng/µl and the degree of purity was 2.07. the results of rt-pcr indicated the success of the bls gene transformation of brucella abortus in l. lactis bacteria. also, a single protein band of 18 kda was observed in transformed l. lactis.conclusion: the present study showed that the bls gene of the probiotic l. lactis transfected with pnz8148-usp45-bls is expressed by electroporation.