فعالیت پروتئازی در ساب تایپ‌های مختلف بلاستوسیستیس در اصفهان

مقدمه: بلاستوسیستیس، تک‌یاخته‌ای خارج سلولی و غیر متحرک بوده که در حال حاضر شایع‌ترین تک‌یاخته‌ی دستگاه گوارش انسان و طیف وسیعی از موجودات است. با این‌که زمان طولانی از شناسایی آن می‌گذرد، اما نقش آن در بیماری و سلامت افراد بحث‌برانگیز است. پروتئاز بلاستوسیستیس، یکی از فاکتورهای مهم در ایجاد علائم می‌باشد. در این مطالعه فعالیت پروتئازی در چند ساب‌تایپ به ‌دست ‌آمده مورد بررسی قرار گرفت. روش‌ها: نمونه‌ی مدفوع 600 فرد مراجعه‌کننده به مراکز آزمایشگاهی شهر اصفهان جمع‌آوری شد. نمونه‌ها به‌ صورت میکروسکوپی بررسی گردید و نمونه‌های بلاستوسیستیس مثبت در محیط کشت داده شدند، با استفاده از روش فایکول بلاستوسیستیس‌ها به‌ صورت خالص جدا گردید. برای مشخص نمودن ساب‌تایپ‌‌ها (polymerase chain reaction) pcr و تعیین ‌توالی انجام پذیرفت. جهت ارزیابی فعالیت پروتئازی روش gelatin/sdspage مورد استفاده قرار گرفت. یافته‌ها: در روش بررسی مستقیم میکروسکوپی، 50 نمونه (8/33 درصد) از لحاظ بلاستوسیستیس مثبت بود که 34 نمونه در کشت مثبت و pcr شد. از این تعداد، 18 نمونه تعیین توالی گردید و 4 نوع ساب‌تایپ 31 و 6 جدا گردید. در ساب تایپ‌های مختلف، تفاوت سایز باندهای حاصل از فعالیت پروتئازهای مختلف مشهود بود. در ساب‌تایپ 31 یک باند با وزن 20 کیلودالتونی به صورت مشترک مشاهده گردید. ساب‌تایپ 6 الگوی باندها کاملاً متفاوت با سایر ساب‌تایپ‌ها بود. نتیجه‌گیری: در ساب‌تایپ‌های مختلف، تفاوت سایز باند پروتئازی مشاهده گردید که می‌تواند دلیلی بر تفاوت پروتئازی و احتمالاً بیماری‌زایی در نوع ساب‌تایپ‌های مختلف ‌باشد. در این مطالعه با انجام روش فایکول از محیط کشت مدفوع، نتایج قابل ‌اعتمادتری به دست آمد.

protease activity in different blastocystis subtypes in isfahan

background: blastocystis is an extracellular and immobile protozoan known as the most common protozoan found in the human gastrointestinal tract and a wide range of animals. although it takes a long time to identify it, its role in the disease and health of people is controversial. parasite protease is one of the important factors in eliciting symptoms. thus, this study investigated protease activity in several subtypes.methods: stool samples were collected from 600 patients referred to isfahan laboratory centers. the samples were examined microscopically and the blastocysts positive samples were cultured in medium. the blastocysts were purified using the ficoll method. pcr and sequencing were performed to identify the subtypes. gelatin/sdspage method was used to evaluate protease activity.findings: a total of 34 samples was positive in culture and pcr. of these, 18 samples were sequenced, and 4 subtypes 13 and 6 were isolated. subtype 2 was more common. in the gelatin/ sdspage method, a large difference in the size of the bands resulting from protease activity was evident in different subtypes. 20 kda band was observed in subtypes 13. in subtype 6, the band pattern was completely different from other subtypes.conclusion: differences in protease band size were observed in different subtypes, which could probably be the reason for the difference in protease activity and pathogenicity in different subtypes. the present study obtained more reliable results using the ficoll method.