بهینه‌سازی بیان پروتئین اینترلوکین-5 در باکتری escherichia coli سویه‌ی bl21

مقدمه: در آسم، رابطه‌ی بین تعداد ائوزینوفیل‌ها و شدت بیماری، این فرضیه را تقویت می‌کند که ائوزینوفیل، سلول موثر اصلی در التهاب راه‌های هوایی است. تکامل ائوزینوفیل به طور عمده با اینترلوکین5 تنظیم می‌شود. بنابراین، با ممانعت از عملکرد اینترلوکین 5 (il5)، می‌توان حداقل یکی از دلایل ایجاد آسم را سرکوب کرد. برای تولید آنتاگونیست‌هایی مثل آپتامر ضد اینترلوکین5، لازم است این پروتئین به مقدار زیاد و با خلوص بالا بیان گردد. مطالعه‌ی حاضر با هدف تهیه‌ی اپتامر ضد il5 به جای آنتی‌بادی جهت استفاده در درمان بیماری‌های ائوزینوفیلیک و بیان این پروتئین در یک سیستم پروکاریوتی انجام شد.روش‌ها: ابتدا سازه‌ی حاوی complementary dna (cdna) ژن پروتئین اینترلوکین5 طراحی و سفارش ساخت در وکتور pet28a داده شد. وکتور بیانی به باکتری‌های مستعد شده‌ی escherichia coli bl21 (de3) تبدیل شد. سپس، بیان پروتئین با تغییر شرایط دما و زمان انکوباسیون و میزان isopropyl β d1thiogalactopyranoside (iptg) بهینه گردید. ارزیابی بیان پروتئین با به کار گیری روش‌های western blot و sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (sdspage) و در مراحل مختلف صورت گرفت.یافته‌ها: شرایط بهینه برای بیان پروتئین اینترلوکین5، غلظتی از باکتری که در طول موج 600 نانومتر جذب بین 0.8-0.6 داشت، غلظت نهایی 1 میلی‌مولار برای iptg، 18 ساعت انکوباسیون در دمای 29 درجه‌ی سانتی‌گراد و شتاب 150 دور/دقیقه بود. باند 13 کیلودالتونی روی ژل پلی‌آکریل‌آمید در sdspage و غشای نیتروسلولزی در روش western blot تایید کننده‌ی بیان پروتئین اینترلوکین5 بود.نتیجه‌گیری: از این پروتئین، در فرایندهایی چون تهیه‌ی آپتامر بر علیه il5 و کیت‌های enzymelinked immunosorbent assay (elisa)ی مخصوص اندازه‌گیری il5 می‌توان استفاده نمود. در این فرایندها، به آنتی‌ژن با فولدینگ بسیار صحیح نیاز نمی‌باشد. بنابراین، بیان در سیستم پروکایوتی به علت بازده بالا انجام شد.