|
|
|
|
کلون، بیان و تخلیص پروتئین نوترکیب هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا h1n1 انسانی در رده‌ی یوکاریوتیک سلول حشره با استفاده از وکتور باکولوویروس
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
راشدی نیلوفر ,تقی‌زاده مرتضی ,محمدی‌نژاد پریسا ,مهدوی مهدی ,جلالی‌راد رضا
|
|
منبع
|
مجله دانشكده پزشكي اصفهان - 1399 - دوره : 38 - شماره : 572 - صفحه:260 -266
|
|
چکیده
|
مقدمه: ویروس آنفلوانزا h1n1 به عنوان عامل بیماری‌زا و تهدید کننده‌ی حیات انسان مطرح می‌شود. واکسیناسیون، از راه‌های موثر برای پیش‌گیری و مهار بیماری آنفلوانزا است. تولید پروتئین نوترکیب هماگلوتینین در سیستم بیانی باکولوویروس، در بستر سلول یوکاریوت حشره (sf9) به عنوان یک راهکار موثر پیشنهاد شده است.روش‌ها: توالی ژن هماگلوتینین ویروس آنفلوانزا h1n1 از national center for biotechnology information (ncbi) استنتاج و پس از طراحی پرایمر اختصاصی، توالی با استفاده از هضم آنزیمی در پلاسمید pfastbachta کلون گردید و برای تولید یک بکمید نوترکیب به سلول dh10bac انتقال داده شد. پس از استخراج پلاسمید مربوط و تایید صحت کار، به داخل سلول حشره ترانسفکت گردید و بعد از بیان پروتئین توسط سلول sf9، با روش sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (sds-page) و western blot، حضور پروتئین نوترکیب تایید شد.یافته‌ها: ژن هماگلوتینین با طول 654 جفت‌باز در پلاسمید pfastbachta به کمک دو آنزیم bamhi و xhol ساب کلون گردید. سلول حشره بعد از دریافت بکمید نوترکیب، پروتئینی به وزن تقریبی 60 کیلودالتون را بیان نمود. پس از استخراج پروتئین، با روش‌های sds-page و western blot تایید انجام گرفت و با روش lowry، غلظت پروتئین اندازه‌گیری شد.نتیجه‌گیری: سیستم بیانی باکولوویروس برای تولید پروتئین‌هایی با ساختار پیچیده مفید است. به طور کلی، از این طرح می‌توان به این نتیجه رسید که این پروتئین در سلول حشره به میزان بالایی بیان می‌شود و به دلیل تشابه سیستم آن با سیستم انسانی، می‌تواند در آینده به عنوان جایگزین مناسب برای تخم‌مرغ‌های جنین‌دار در زمینه‌ی واکسیناسیون مورد استفاده قرار گیرد.
|
|
کلیدواژه
|
ویروس آنفلوانزا نوع a، زیرگروه h1n1، هماگلوتینین، سلول sf9، باکولوویروس
|
|
آدرس
|
دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد, گروه زیست‌شناسی, ایران, دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد, گروه زیست‌شناسی, ایران. سازمان تحقیقات و ترویج کشاورزی, موسسه‌ی تحقیقات واکسن و سرم‌سازی رازی, بخش تحقیق و توسعه, ایران, دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد, گروه زیست‌شناسی, ایران, دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد, گروه زیست‌شناسی, ایران. دانشگاه علوم پزشکی تهران, دانشکده‌ی داروسازی, مرکز تحقیقات واکسن‌های نوترکیب, ایران, دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد, گروه زیست‌شناسی, ایران. انستیتو پاستور ایران, مجتمع تولیدی- تحقیقاتی, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Cloning, Expression, and Purification of the Recombinant Hemagglutinin of Human Influenza Virus H1N1 in the Eukaryotic Insect Cells Using Baculovirus Vector
|
|
|
|
|
Authors
|
Rashedi Niloufar ,Taghizadeh Morteza ,Mohamadynejad Parisa ,Mahdavi Mehdi ,Jalalirad Reza
|
|
Abstract
|
|
|
Keywords
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|