کلونینگ و بیان آنتاگونیست گیرنده‌ی اینترلوکین 1 نوترکیب انسانی در سیستم‌های بیانی escherichia coli شامل (de3) bl21، (de3) origami و (de3) rosetta

مقدمه: آنتاگونیست گیرنده‌ی اینترلوکین 1 (il-1ra)، پروتئینی 153 آمینواسیدی (با وزن مولکولی 16.83 کیلودالتون) است. این پروتئین دارویی، با نام تجاری آناکینرا شناخته ‌شده است و کاربرد موثری در درمان آرتریت روماتوئید دارد. این مطالعه، به ‌منظور بررسی بیان پروتئین نوترکیب آنتاگونیست گیرنده‌ی اینترلوکین 1 در سویه‌های باکتری escherichia coli (e. coli) انجام شد.روش‌ها: بهینه‌سازی ژن il1 ra با استفاده از genscript انجام شد و در پلاسمید puc18 به عنوان وکتور کلونینگ، قرار گرفت. سپس، این پلاسمید با دو آنزیم محدود کننده‌ی ndei و bamhi برش خورد. ژن il-1ra از روی ژل تخلیص شد. ژن il-1ra به داخل وکتور بیانی وارد شد. سازه‌ی کاست بیانی به داخل باکتری‌های e. coli origami، e. coli bl21 و e. coli rosetta با روش کلرید کلسیم (cacl2) و شوک حرارتی منتقل شد.یافته‌ها: تشخیص و تایید کلنی‌های منتقل شده با colony polymerase chain reaction (colony pcr) انجام شد. القای این ژن با به کار گیری -isopropyl β d-1-thiogalactopyranoside (iptg) انجام گرفت. بیان پروتئین با استفاده از روش‌‌های western blotting و sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (sds-page) تایید شد و به وسیله‌ی رزین نیکل تخلیص گردید. آنالیز بیانی سوش‌های e. coli ترانسفورم شده تایید کرد که ورود سازه به داخل وکتور بیانی انجام‌ شده است. وزن مولکولی پروتئین بیان‌ شده، 16.83کیلو دالتون برآورد شد.نتیجه‌گیری: در این مطالعه، آنتاگونیست گیرنده‌ی اینترلوکین 1 انسانی در باکتری e. coli origami با مقادیر بالا نسبت به سویه‌های دیگر e. coli، به طور موفقیت‌آمیزی تولید شد. باکتری e. coli origami می‌تواند به‌ عنوان میزبان مناسب در تولید il-1ra نوترکیب انسانی مورد استفاده قرار گیرد و این فن‌آوری قابلیت بومی‌سازی دارد.