شناسایی گونه‌های fasciola در استان‌های گرمسیر و سردسیر غرب ایران با استفاده از روش‌های مولکولی و ریخت‌شناسی

مقدمهfasciolosis یک بیماری انگلی است که توسط گونه‌های fasciola hepatica، fasciola gigantica و fasciola حد واسط ایجاد می‌گردد. این بیماری، در طیف گسترده‌ای از گونه‌های پستانداران نظیر انسان در سراسر جهان شیوع یافته است. روش polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (pcr-rflp)، یکی از بهترین روش‌های تشخیص گونه‌های fasciola در نقاطی است که دو گونه‌ی fasciola hepatica و fasciola gigantica در دام‌های اهلی وجود دارند.روش‌هادر این مطالعه، کرم‌های fasciola از کشتارگاه‌های چهار استان غرب کشور ایران جمع‌آوری گردید. گونه‌های انگلی، با استفاده از روش‌های ریخت‌شناسی و مولکولی شناسایی شدند. از 715 راس دام (گاو و گوسفند) مورد بررسی، 92 راس کبد آلوده به کرم بالغ fasciola داشتند. 18 کرم بالغ از نظر ریخت‌سنجی بررسی شدند و از تخم این کرم‌ها، استخراج dna صورت گرفت. قطعه‌ای از ژنوم نواحی its1,5.8s,its2 تکثیر و با استفاده از آنزیم tasi، آزمون pcr-rflp روی قطعات تکثیر یافته انجام شد.یافته‌هادر مجموع، 178 کرم بالغ fasciola از کبدهای آلوده‌ی گاو و گوسفند جداسازی گردید. طی بررسی که در فصل بهار سال 1396 انجام شد، بیشترین و کمترین آلودگی به ترتیب مربوط به استان ایلام (گاو 28/57 درصد) و استان خوزستان (گوسفند 8/26 درصد) گزارش گردید. آنزیم tasi در fasciola hepatica سه قطعه‌ی به طور تقریبی 427، 360 و 117 جفت‌باز و fasciola gigantica، سه قطعه‌ی به طور تقریبی 360، 220 و 117 جفت‌باز بر روی ژل آگارز 1/5 درصد ایجاد کرد.نتیجه‌گیریبر اساس یافته‌های این مطالعه، اندازه‌گیری‌های میکروسکوپی می‌تواند برای توصیف میکروسکوپیک گونه‌های fasciola کافی باشد، اما استفاده از روش pcr-rflp با استفاده از آنزیم tasi ساده‌تر، سریع‌تر و دقیق‌تر می‌باشد. استفاده از روش pcr-rflp و نشانگر ژنتیک its، جهت شناسایی گونه‌های fasciola بسیار مناسب است.

Identification of Fasciola Species in Warm and Cool Western Provinces of Iran, Using Molecular and Morphometric Methods

Background: Fascioliasis is a parasitic disease caused by Fasciola hepatica, Fasciola gigantica, and intermediate Fasciola, which is present in a wide variety of mammalian species, including humans, throughout the world. The polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism (PCRRFLP) method is one of the best methods for detecting Fasciola species in places where there are two types of Fasciola hepatica and Fasciola gigantica in domestic livestock.Methods: In this study, Fasciola worms were collected from slaughterhouses in five western provinces of Iran. Parasitic species were identified using morphological and molecular methods. A total of 756 livestocks (cattle and sheep) were studied, with 89 livers infected with adult Fasciola worms. 18 worms were morphometrically examined, and DNA from the eggs of these worms were extracted. A fragment of genome containing the ITS1,5.8S, ITS2 gene was amplified and utilized by TasI enzyme, and PCRRFLP was performed on amplified parts.Findings: A total of 178 adult Fasciola worm were isolated from infected cattle and sheep livers. During the spring 2017, the highest and the lowest levels of contamination were reported in Ilam Province (sheep, 28.53%) and Kermanshah Province (sheep, 7.9%), Respectively. In Fasciola hepatica, TasI enzyme produced three fragments of 427, 360 and 117 base pair (bp), and for Fasciola gigantica, it produced three fragments of 360, 220, and 117 bp on 1.5% agarose gel.Conclusion: According to the study, microscopic measurements can be sufficient for microscopic characterization of Fasciola species, but the PCRRFLP method using TasI enzyme is simpler, faster, and more accurate. The use of PCRRFLP method and ITS genetic marker is very suitable for identification of Fasciola species.