ساخت و ارزیابی یک سازه‌ی dna بیان‌کننده‌ی پروتئین core ویروس هپاتیت c متصل به آنتی‌ژن s ویروس هپاتیت b به عنوان یک کاندید واکسن

مقدمه: با وجود این که ویروس هپاتیت c (hepatitis c virus یا hcv) یکی از عوامل مهم ایجاد‌کننده‌ی بیماری‌های مزمن کبدی می‌باشد، هنوز واکسن مناسبی برای آن تهیه نشده است. هدف از این مطالعه، ساخت یک سازه‌ی بیان‌کننده‌ی توالیcore (aa: 1-122) ویروس هپاتیت c متصل به آنتی‌ژن s ویروس هپاتیت b (hbsag یا hepatitis b surface antigen) و تایید بیان آن در سلول‌های یوکاریوتی بود.روش‌ها: در ابتدا توالی core این ویروس با استفاده از پرایمرهای دارای جایگاه برش آنزیمی bamhi/ecorv از روی وکتور pivex2.4a حاوی این ژن تکثیر شد و در وکتور pcdna3.1 حاوی hbsag خطی‌شده با آنزیم‌های مذکور کلون گردید. ارزیابی و تایید ساختار نوترکیب به وسیله‌ی برش آنزیم‌های محدودکننده و در نهایت تعیین توالی صورت گرفت. پلاسمید ساخته‌شده‌ی نهایی (pchcore) در رده‌ی سلولی hek293t ترانسفکت شد و ارزیابی نهایی بیان توسط تست western blot بر روی سلول‌های hek293t ترانسفکت‌ شده به وسیله‌ی آنتی‌بادی پلی‌کلونال آنتی hbsag موشی انجام شد.یافته‌ها: توالی ژن (122-1)core ویروس هپاتیت c با موفقیت تکثیر گردید و نتایج ارزیابی، برش آنزیمی و تعیین توالی تاییدکننده‌ی صحت ساختار نوترکیب pchcore و کلونینگ انجام ‌شده بود. نتیجه‌ی western blot بیانگر انتقال موفق پلاسمید و بیان ژن هدف در سلول‌های یوکاریوتی بود.نتیجه‌گیری: با توجه به ساخت و بیان موفقیت‌آمیز ساختار hbs-core در سلول‌های یوکاریوتی و به دلیل احتمال افزایش پاسخ‌های ایمنی توسط آنتی‌ژن hbs به صورت فیوژن با پروتئین core (بر اساس تحقیقات قبلی)، سازه‌ی بیانی حاوی ژن core ویروس هپاتیت c متصل ‌شده به این آنتی‌ژن، ممکن است باعث القای بیشتر پاسخ‌های ایمنی علیه پروتئین core شود و بتواند به عنوان واکسن موثر به منظور کنترل عفونت hcv به کار رود.

Construction and Evaluation of DNA Vaccine Encoding Fusion Protein of Hepatitis C Virus Core Protein and Hepatitis B Surface Antigen as a Vaccine Candidate

<div><p><strong>Background:</strong><em> </em>While hepatitis C virus (HCV) is the major cause of acute and chronic hepatitis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma worldwide, no vaccine against this infection has been proved to date. Cellular immune responses play an important role for eradicating persistent viral infections. Among different vaccine strategies, the use of DNA vaccine has been shown to be a promising approach for enhancing cellular immune responses. In spite of their advantages, DNAbased vaccines might induce weaker antibody and cytotoxic Tlymphocyte responses compared to protein immunization. To overcome this obstacle, several methods such as different immunization regimens, fusion of particle forming units [like hepatitis B surface antigen (HBsAg)] and coexpressing cytokines have been tested. The aim of this study was to design, construct, and evaluate an HBsAgfused corebased DNA vaccine against HCV infection.</p><p><strong>Methods:</strong><strong> </strong>The HCV core gene was amplified by polymerase chain reaction (PCR) and cloned in BamHI/EcoRV sites of pcDNA3.1 containing HBsAg. The constructed plasmid (pCHCORE) was analyzed by restriction enzyme and sequencing analyses and evaluated for the protein expression in HEK293T cell line by western blot analysis<em> </em>with antiHBsAg polyclonal antibody.</p><p><strong>Findings:</strong><strong> </strong>The correctness of the constructed DNA vaccine was shown by restriction enzyme analysis and sequencing.  Western blotting results confirmed the expression of HBsAgHCV fusion protein with an expected molecular weight in HEK239T cell line.</p><p><strong>Conclusion:</strong> In accordance with previous studies, the constructed vector (pCHCORE) compromising the fusion of HBsAg to HCV core in pCDNA3 plasmid might be used as a HCV DNA vaccine (due to proper expression in cell lines) to induce augmented cellular immune responses.</p></div>