همسانه‌سازی و بیان آنزیم لیپواکسیژناز پوستی ambystoma mexicanum (loxe) در باکتری escherichia coli

مقدمه: آنزیم‌های لیپواکسیژناز نقش مهمی در انواع مکانیسم‌های موجودات زنده ایفا می‌کنند. تا کنون مطالعات زیادی بر روی عملکرد لیپواکسیژناز در انسان و سایر موجودات انجام گرفته است. فعال شدن این آنزیم در یوکاریوت‌ها و اثرگذاری روی سوبسترای خود (اسید آراشیدونیک) باعث تولید واسطه‌های گوناگونی می‌شود. یکی از محصولات واکنش این آنزیم لکوترین است. این واسطه‌ی التهابی نقش مهمی در فرایند ترمیم زخم ایفا می‌کند. مطالعات اخیر نشان داده ‌است که آنزیم لیپواکسیژناز loxe استخراج شده از یک دوزیست (ambystoma mexicanum) در مقایسه با لیپواکسیژناز انسانی تاثیری به مراتب بیشتر در فرایند بهبود زخم از خود نشان می‌دهد. تا به حال، همسانه‌سازی و بیان این ژن در باکتری انجام نشده است و از آن جا که اولین قدم برای شناسایی و تعیین ویژگی‌های هر پروتئین، در دست داشتن مقادیر زیادی از آن است، در تحقیق حاضر، همسانه‌سازی و بیان لیپواکسیژناز اکسولوتل (loxe) مورد توجه قرار گرفت.روش‌ها: ابتدا توالی کد کننده‌ی لیپواکسیژناز اکسولوتل بر اساس توالی آمینو اسیدی پروتئین مورد نظر، طراحی و پس از بهینه‌سازی کدون‌ها برای بیان حداکثری در باکتری e. coli (escherichia coli)، در ناقل puc57 قرار گرفت. قطعه‌ی کد کننده‌ی سنتز شده پس از هضم با آنزیم‌های برشی مورد نظر، در چهارچوب خواندن ناقل بیانی pet21-a قرار داده شد و در میزبان بیانی bl21-e. coli برای بیان پروتئین 71 کیلو دالتونی loxe (623 اسید آمینه) در حضور iptg (isopropyl-beta-d-thiogalactopyranoside) القا گردید.یافته‌ها: کلونینگ loxe با صحت انجام گرفت و بیان این آنزیم در باکتری e. coli امکان پذیر است.نتیجه‌گیری: آنالیز sds-page (sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis) نشان دهنده‌ی بیان فراوان پروتئین مورد نظر در مقایسه با نمونه‌ی شاهد بود.