تولید پروکاریوتی پروتئین 2m ویروس آنفلوانزا در اتصال با پروتئین شوک حرارتی لیشمانیا ماژور به منظور دستیابی به یک واکسن کارآمد

مقدمه: ویروس‌های آنفلوانزا عامل عمده‌ی بیماری و مرگ و میر ناشی از بیماری‌های تنفسی در جهان به شمار می‌روند و واکسیناسیون، بهترین راه پیشگیری می‌باشد. به علت تغییرات آنتی ژنیک ویروس آنفلوانزا، بازآرایی هر ساله‌ی واکسن اجتناب ناپذیر است. یکی از روش‌های مقابله با این مشکل، طراحی واکسن با استفاده از آنتی ژن‌های حفاظت شده‌ی ویروس آنفلوانزا است. پروتئین 2m که در پوشش ویروس، کانال یونی را تشکیل می‌دهد و با تغییرات ph باعث ورود ویروس و ایجاد عفونت در سلول‌های میزبان می‌شود، در بین همه‌ی ویروس‌های آنفلوانزای a حفاظت شده است و هدف مناسبی برای تولید واکسن با ایمنی وسیع‌الطیف می‌باشد. در این مطالعه، به منظور تولید یک واکسن کارآمد، بخشی از ژن 70hsp (70heat shock proteins) لیشمانیا ماژور به ژن 2m ویروس آنفولانزای 1n1h/a متصل شد و پروتئین نوترکیب کایمر در سیستم پروکاریوتی بیان گردید.روش‌ها: برای ساخت سازه‌ی بیانی، ابتدا ژن کد کننده‌ی hsp در پلاسمید a28pet در بین محل اثر آنزیم‌های bamhi و hindiii جای‌سازی گردید. سپس ژن 2m به روش pcr (polymerase chain reaction) و با استفاده از پرایمرهای اختصاصی، تکثیر یافت و در محل اثر سایت آنزیمی bamhi در وکتور خطی و دفسفریله شده‌ی a28pet و در بالادست ژن 70hsp کلون گردید. پس از تعیین ترادف و تایید صحت کلونینگ، بیان پروتئین نوترکیب در سلول‌های 21bl مورد بررسی قرار گرفت.یافته‌ها: نتایج کلنی pcr و هضم آنزیمی، صحت سازه‌های نوترکیب را تایید کردند. نتایج تعیین توالی نشان داد که ژن 2mدر وکتور a28pet و در بالادست ژن 70hsp به طور صحیح و در قاب خواندنی دنباله‌ی هیستیدینی کلون شده است. تولید پروتئین‌های نوترکیب به روش وسترن بلات (western blot) تایید گردید.نتیجه‌گیری: پروتئین‌های شوک حرارتی توانایی تحریک و ایجاد هر دو نوع ایمنی ذاتی و اکتسابی را دارند و اتصال آن به آنتی ژن هدف باعث افزایش پاسخ‌های ایمنی می‌شود. پروتئین کایمر تهیه شده در این مطالعه، پس از تخلیص می‌تواند به عنوان یک کاندیدای واکسن زیر واحدی مناسب برای پیشگیری از عفونت آنفلوانزا در نظر گرفته شود. برای بررسی اثرات ادجوانتی 70hsp لیشمانیا ماژور بر روی پروتئین 2m، ارزیابی ایمونوژنیسیتی آن در مدل‌های حیوانی در مطالعات آتی انجام خواهد شد.