|
|
|
|
مقایسه‌ی تعداد نسخههای درج شده‌ی ژن 10-ip با استفاده از سیستم تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی بر اساس سیستم ترانسپوزونی piggybac در ژنوم سلول‌های human embryonic kidney
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
میرزاپور هادی ,کرم‌زاده آرزو ,خان احمد حسین ,صالحی رسول ,خیرالهی مجید
|
|
منبع
|
مجله دانشكده پزشكي اصفهان - 1393 - دوره : 32 - شماره : 275 - صفحه:170 -181
|
|
چکیده
|
مقدمه: یکی از چالش‌های پیش رو در روش‌های مرسوم تولید پروتئین نوترکیب که ترانسژن به صورت خطی به سلول میزبان وارد می‌شود، هتروژنی در تعداد نسخههای ترانسژن در کلون‌های مختلف به دست آمده است که منجر به بیان ژن در سطوح مختلف می‌شود. گذشته از کارایی پایین درج خطی در ژنوم میزبان، پدیده‌ای دیگر به نام position effect باعث کمتر شدن کارایی بیان ژن می‌گردد. piggybac کلاسی از dna ترانسپوزونی است که می‌تواند به صورت مکانیزم cut and paste در ژنوم سلول میزبان جابه‌جا شود. برخی خصوصیات منحصر به فرد این ترانسپوزون، آن را به یکی از وکتور‌های مناسب در مطالعات انتقال ژن تبدیل کرده است. انتقال ترانسژن با حجم بالا و درج در نواحی فعال از نظر رونویسی، از جمله خصوصیات مهم این ترانسپوزون است که می‌توان از آن در تولید پروتئین نوترکیب با کارایی بالا بهره برد. در این تحقیق، تعداد نسخههای درجی در کلون‌های به دست آمده از سیستم تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی این سیستم در رده‌ی سلولی hek (human embryonic kidney) مقایسه شده است.روش‌ها: تولید سازه‌‌های تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی سیستم ترانسپوزاز حاوی ژن 10-ip و ژن مقاومت به آنتی بیوتیک هیگرومایسین با استفاده از روش‌های کلونینگ مولکولی به انجام رسید. رده‌ی سلولی hek پس از تکثیر در پلیت‌های سلولی جهت انجام ترانسفکشن seed شدند. سازه‌‌ها با استفاده از کیت لیپوفکتامین 2000 ترانسفکت شدند و پس از 48 ساعت مورد تیمار با آنتی بیوتیک هیگرومایسین به مدت دو هفته قرار گرفتند. کلون‌های به دست آمده پس از استخراج dna ژنومی با تکنیک absolute real-time pcr (absolute real-time polymerase chain reaction) از نظر تعداد نسخههای ژنی درج شده مورد بررسی قرار گرفتند.یافته‌ها: تعداد نسخههای ژنی به دست آمده با استفاده از سیستم تک پلاسمیدی در هر سلول، برابر با 5 نسخه بود؛ در حالی که این عدد در سیستم دو پلاسمیدی برابر با دو نسخه بود.نتیجه‌گیری: بررسی نتایج حاصل از تعداد نسخههای درجی در سیتم‌‌های تک پلاسمیدی و دو پلاسمیدی نشان داد که سیستم تک پلاسمیدی کارایی بالاتری از لحاظ تعداد نسخههای درجی دارد و می‌توان با کلون کردن ژن مورد نظر و کاست بیان کننده‌ی آنزیم ترانسپوزاز در یک پلاسمید واحد، تعداد نسخ بیشتری جهت بیان بیشتر پروتئین نوترکیب به دست آورد.
|
|
کلیدواژه
|
piggybac ، ترانسپوزون؛ ژن درمانی؛ پروتئین نوترکیب؛ تعداد نسخههای ترانسژن
|
|
آدرس
|
دانشگاه علوم پزشکی اصفهان, دانشکده‌ی پزشکی و کمیته‌ی تحقیقات دانشجویی, گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی, ایران, دانشگاه علوم پزشکی اصفهان, دانشکده‌ی پزشکی، کمیته‌ی تحقیقات دانشجویی, گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی, ایران, دانشگاه علوم پزشکی اصفهان, دانشکده‌ی پزشکی, گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی, ایران, دانشگاه علوم پزشکی اصفهان, دانشکده‌ی پزشکی, گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی, ایران, دانشگاه علوم پزشکی اصفهان, دانشکده‌ی پزشکی، مرکز تحقیقات بیماری های ارثی کودکان, گروه ژنتیک و بیولوژی مولکولی, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Comparison of Inserted Mouse IP10 Gene Copy Number in HelperDependent and Independent System Based on PiggyBac Transposition in Human Embryonic Kidney Cells
|
|
|
|
|
Authors
|
Mirzapour Hadi ,Karamzade Arezo ,Khanahmad Hossein ,Salehi Rasoul ,Kheirollahi Majid
|
|
Abstract
|
|
|
Keywords
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|