بیان و تخلیص ناحیه‌ی کینازی پروتئین نوترکیب گیرنده‌ی عامل رشد فیبروبلاستی نوع 2b و بررسی تغییرات ساختاری آن بر اثر برهم‌کنش آن با گالیک اسید

مقدمه: گیرنده‌ی‏ عامل رشد فیبروبلاستی 2b (fgfr2b یا fibroblast growth factor receptor 2b) در مسیر پیام‏رسانی سلولی و تنظیم فرایندهای مهم زیستی نظیر تمایز و تکثیر سلولی نقش اساسی دارد. تغییرات ژنتیک نظیر جهش نقطه‏ای در ناحیه‌ی تیروزین کینازی fgfr2b با سرطان پستان، تخمدان و پروستات در ارتباط است. این مطالعه، به منظور بیان و خالص‏سازی مقدار مناسبی از ناحیه‌ی کینازی fgfr2b انسانی و بررسی تغییرات ساختاری آن با گالیک اسید انجام شد. روش‌ها: بیان پروتئین نوترکیب با استفاده از iptg (isopropyl β-d-1-thiogalactopyranoside) 1 میلی‏مولار در دمای 37 درجه‌ی سانتی‌گراد القا و با استفاده از الکتروفورز روی ژل پلی‏آکریلامید در حضور سدیم دودسیل سولفات (sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis یا sds-page) ارزیابی شد. پروتئین بیان شده با استفاده از کروماتوگرافی میل ترکیبی خالص شد و فعال بودن نمونه‌ی پروتئین بعد از دیالیز بررسی شد. طیف فلوئورسانس و دناتوراسیون شیمیایی پروتئین خالص شده، در حضور غلظت‌های مختلف گالیک اسید سنجیده شد. یافته‌ها: بررسی sds-page قبل و بعد از القا شدن نشان داد که پروتئین بیان شده در دمای 20 درجه‌ی سانتی‌گراد محلول است. همچنین، تایید کرد که پروتئین خالص شده است. بررسی طیف‌سنجی فلوئورسنس، افزایش شدت نشر را با افزایش تدریجی غلظت گالیک اسید نشان داد. دناتوراسیون شیمیایی ساختار سوم زیر واحدهای ناحیه‌ی کینازی را در حضور گالیک اسید تغییر داد. نتیجه‌گیری: با توجه به یافته‌ها، ناحیه‌ی‏ کینازی گیرنده‏‌ی نوترکیب عامل رشد فیبروبلاستی 2b که یک پروتئین 38 کیلودالتونی است، تولید و خالص گردید. تغییرات ساختار سوم دومین کینازی، موجب ناپایدار شدن آن در حضور گالیک اسید گردید. این ناپایداری در سطح مولکولی، می‌تواند موجب اختلال در مسیر پیام‌سانی سلول شود.