ارزیابی پایدارترین ژن‌های مرجع در بافت بیضه‌ی مردان آزواسپرم

قدمه: واکنش pcr کمی در زمان واقعی (real-time quantitative reverse transcriptase-polymerase chain reaction یا qrt-pcr)، یک روش سریع، حساس و قابل اعتماد برای مقایسه‌ی بیان ژن‌ها می‌باشد که مستعد خطاهای تکنیکی فراوانی است. همچنین، استفاده از ژن‌های مرجع (خانه‌گردان) تاریخی، همیشه و در همه‌ی بافت‌ها مناسب نمی‌باشد. در این مطالعه، به بررسی و انتخاب ژن(های) مرجع مناسب در بافت بیضه پرداخته شد تا بتوان از این ژن(های) مناسب برای انجام واکنش qrt-pcr استفاده کرد.روش‌ها: نمونه‌ی بافت بیضه از 15 مرد آزواسپرم غیر انسدادی (noa یا non-obstructive azoospermia) به عنوان گروه مورد و 15 مرد آزواسپرم انسدادی (oa یا obstructive azoospermia) به عنوان گروه شاهد گرفته شد. با استفاده از نرم‌افزار beacon designer 8.1 پرایمرهای مناسب برای چهار ژن مرجع glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (gapdh)، ribosomal protein l37 (rpl37)، ring finger protein 1 (ring1) و eukaryotic translation elongation factor 2 (eef2) طراحی شد. بهینه‌سازی‌های قبل از انجام qrt-pcr، شامل کنترل مقدار rna برای سنتز complementary dna (cdna) و تعیین غلظت مناسب پرایمرها انجام شد. منحنی ذوب رسم گردید و مقادیر quantitation cycle (cq) استخراج شد. آنالیز میانگین cq در دو گروه شاهد و مورد با استفاده از نرم‌افزار bestkeeper نسخه‌ی 1 انجام شد و ژن‌های مرجع مناسب انتخاب گردید.یافته‌ها: مقایسه‌ی میانگین cq بین دو گروه noa و oa حاکی از آن بود که دو ژن rpl37 و gapdh به ترتیب با انحراف معیار 1/39 و 1/67 کمترین تغییرات را در بین چهار ژن مرجع کاندیدا نشان داد. بنا بر این، دو ژن rpl37 و gapdh، به ترتیب با مقادیر r برابر با 0/959 و 0/927، به عنوان مناسب‌ترین ژن‌های مرجع در بافت بیضه انتخاب شد.نتیجه‌گیری: دو ژن rpl37 و gapdh به ترتیب، مناسب‌ترین ژن‌های مرجع در بافت بیضه هستند و برای مطالعه‌ی بیان ژن‌ها با استفاده از روش qrt-pcr مناسب می‌باشند