ساخت سازه‌ی ژنی pbud.ce4.1 ifnβ wild type و بررسی سطح بیان ژن اینترفرون بتای انسانی در رده‌ی سلولی hek293 ترانسفکت شده با این سازه

مقدمه: اینترفرون بتا، از جمله سایتوکاین‌های مهمی است که در پاسخ به عوامل محرک و آنتی‌ژن‌ها بیان می‌شود و در فرایندهای ایمنی و التهاب نقش دارد. در این پژوهش، ضمن کلون نمودن ژن اینترفرون بتا در وکتور pbud.ce4.1، سطح بیان این ژن در مقایسه با حالت بیان پایه در رده‌ی سلولی انسانی hek293 با استفاده از روش real-time pcr (real-time polymerase chain reaction) بررسی گردید.روش‌ها: توالی ژن اینترفرون بتا با استفاده از پرایمرهای اختصاصی حاوی جایگاه برش آنزیمی kpni و bglii از روی وکتور psvmdhfr حاوی این ژن تکثیر شد و سپس، در وکتور pbud.ce4.1 خطی شده با آنزیم‌های پیش‌گفته، کلون گردید. ساختار وکتور نوترکیب، با استفاده از روش هضم آنزیمی، colony pcr و تعیین توالی، بررسی و در نهایت، به درون باکتری مستعد escherichia coli top10 ترانسفورم شد. پس از تکثیر، پلاسمید نوترکیب استخراج و به رده‌ی سلولی hek293 ترانسفکت گردید. استخراج rna، سنتز cdna (complementary dna) و بررسی سطح بیان با استفاده از روش real-time pcr صورت گرفت.یافته‌ها: ژن اینترفرون بتا، تحت پروموتر eef1a وکتور با موفقیت در رده‌ی سلولی hek293 بیان شد. سطح بیان این ژن در اثر ترانسفکشن، 79/9 برابر افزایش نسبت به شاهد را نشان داد. ترانسفکت وکتور فاقد ژن، افزایش بیان 2/87 برابری را نشان داد که احتمال می‌رود، به علت ورود یک ژنوم بیگانه باشد.نتیجه‌گیری: پروتئین‌های تولید شده در سیستم‌های پروکاریوتی، فاقد گلیکوزیلاسیون می‌باشند و در نتیجه، خواص فیزیکوشیمیایی متفاوتی نسبت به حالت طبیعی دارند. بنا بر این، بیان ژن هدف در سلول انسانی تحت پروموتر قوی وکتور انتخابی، از مزایای پژوهش حاضر است. انجام مطالعات پروتئینی در این زمینه، می‌تواند هدف مطالعات آتی باشد.