بررسی تاثیر استروژن بر میزان بیان نشانگرهای عصبی در طی تمایز نوروژنیک سلول‌های بنیادی مشتق از چربی

مقدمه: با توجه به سهولت دستیابی به سلول‌های بنیادی حاصل از بافت چربی نسبت به سایر منابع سلول‌های بنیادی در صورتی که بتوان از عوامل رشد مانند استروژن جهت افزایش تمایز نرونی استفاده نمود، نرون‌های تمایز یافته، در پیوند اتولوگ بیماری‌های عصبی دژنراتیو خاص مانند بیماری پارکینسون و ضایعات نخاعی استفاده‌ی وسیعی دارد. هدف از این مطالعه، ارزیابی تاثیر استروژن بر تمایز عصبی سلول‌های بنیادی مشتق از بافت چربی از طریق ارزیابی بیان نشانگر نورون بالغ (2map یا 2microtubule-associated protein)، نشانگر سلول‌های گلیال (glial fibrillary acidic protein یا gfap) و نشانگر سلول‌های پیش‌ساز عصبی (nestin) بود. روش‌ها: پس از جداسازی سلول‌های بنیادی از بافت چربی، القای عصبی سلول‌های بنیادی از طریق روش تشکیل نروسفر انجام شد. پس از یک هفته، تجمعات سلولی نروسفر تشکیل شده جهت تمایز نهایی، به محیط کشت القای عصب منتقل شد و در گروه تیمار استروژن با دوز 10 نانومول تا انتهای دوره‌ی تمایز روزانه به محیط کشت القای عصب اضافه گردید. سپس ارزیابی بیان نشانگرهای nestin، 2map و gfap در سلول‌های تمایز یافته از طریق تکنیک rt-pcr (reverse transcription-polymerase chain reaction) صورت گرفت. به علاوه، آزمایش mtt [diphenyl tetrazolium bromide assay 2,5 (yl-2- dimethyl thiazol-4,5)3] جهت ارزیابی تکثیر سلولی انجام شد. یافته‌ها: میانگین بیان نشانگرهای nestin و gfap در گروه شاهد نسبت به مورد بیشتر بود و این اختلاف میانگین، از لحاظ آماری معنی‌دار بود (0/050 > p)؛ در حالی که میزان بقای سلولی در دو گروه، اختلاف معنی‌داری را نشان نداد. نتیجه‌گیری: در مجموع، می‌توان دریافت استروژن سبب کاهش بیان نشانگرهای عصبی می‌شود. با این حال، جهت تعیین تاثیر استروژن بر تمایز عصبی سلول‌های بنیادی، پیشنهاد می‌شود این مطالعه به صورت گسترده‌تر و با استفاده از تکنیک‌های حساس‌تری بررسی گردد.

Effects of Estrogen on the Expression of Neural Markers in Differentiated AdiposeDerived Stem Cells

<div><p><strong>Background:</strong><em> </em>Over the past decade, researchers have used the existing knowledge about pathways messaging protocols to successfully stimulate stem cells to generate neurons. Due to the ease of access to adipose tissueobtained stem cells rather than other sources, whereas estrogen factor could be used to improve neural differentiation, antilogous transplantation of differentiated neurons would be widely used for certain degenerative neurological diseases such as Parkinson's disease and spinal cord injuries. The purpose of this study was to evaluate the effect of estrogen on expression of microtubuleassociated protein2 (MAP2),<em> </em>glial fibrillary acidic protein (GFAP)<em> </em>and Nestin markers.</p><p><strong>Methods:</strong><strong> </strong>After the isolation of stem cells from adipose tissue, the neural induction was carried out through neurosphere construction; then, final differentiation of the cells was performed. Neurospheresinged cell were transferred to neural induction medium (control group). In the estrogentreated group, estrogen was added to the culture medium until the end of the day of distinction. Then, evaluation of the expression of neural markers, was performed using reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RTPCR) technique. In addition, MTT assay [3(4,5dimethylthiazol2yl)2,5diphenyltetrazolium bromide] was performed to assess cell viability.</p><p><strong>Findings:</strong><strong> </strong>The mean expression of GFAP and Nestin markers were down regulated in treated group compared to controls (P &lt; 0.05). The difference between the mean of MAP2 expression was not significant between the two groups. In addition, the difference between the mean of cell viability was not significant between two groups, too.</p><p><strong>Conclusion:</strong> In this study, we found that estrogen can decrease the expression of neuronal markers. However, to determine the effect of estrogen on neurogenic differentiation of stem cells, next studies should be done broader using other precise techniques.</p></div><strong>Keywords:</strong> Estrogen, Neurogenesis, Adiposederived stem cell, Reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RTPCR)