تولید لنتی‌ ویروس اینتگراز منفی به منظور بیان گذرای پروتئین مورد نظر و کاهش اثرات جانبی ویروس در ژن درمانی

مقدمه: وکتورهای لنتی ویروسی ابزارهای موثری برای ژن درمانی می‌باشند؛ ولی ورود پرو-ویروس به ژنوم، استفاده از آن‌ها را خطرناک کرده است. بنابراین، وکتورهای لنتی ویروسی ناقص از نظر اینتگراز بی‌خطرتر را می‌توان با ایجاد موتاسیون در ژن اینتگراز تولید نمود تا به طور ویژه، از ورود پرو-ویروس به ژنوم جلوگیری نماید. در این مطالعه، یک وکتور لنتی ویروسی ناقص از نظر ژن اینتگراز نسل دوم، طراحی و ساخته شد؛ این محصول، برای هدف قرار دادن ژن به طور گذرا با وکتور ویروسی مناسب می‌باشد. روش‌ها: با به کار بردن استراتژی جهش زایی هدفمند با تکنیک overlap polymerase chain reaction، یک جهش بدمعنی (d64v) در ناحیه‌ی کاتالیتیک ژن اینتگراز در پلاسمید بسته‌بندی pspax2 ایجاد و با تکنیک توالی‌یابی، تایید گردید. لاین سلولی hek293t با سه پلاسمید pspax2 (طبیعی و ناقص از نظر اینتگراز)، plox (پلاسمید انتقال) و pmd2g (پلاسمید انولپ) ترانسفکت گردید. سپس، ویروس برداشت و در لاین سلولی hek293t ترانسداکت گردید. میزان بیان ژن گزارشگر green fluorescent protein (gfp)، به مدت ده روز، در سلول‌های ترانسداکت شده با ویروس طبیعی و ناقص با میکروسکوپ فلورسنت بررسی گردید. یافته‌ها: ما کاهش تعداد سلول‌های بیان کننده‌ی ژن gfp را با شیب ملایم در سلول‌های ترانسداکت شده با ویروس طبیعی در طول دوره مشاهده کردیم. در مقابل، در مورد ویروس‌های ناقص، کاهش شدیدی در تعداد سلول‌های بیان کننده‌ی ژن gfp داشتیم. نتیجه‌گیری: در این مطالعه، pspax2 ناقص از نظر اینتگراز ساخته و تایید گردید. نتایج نشان داد که وکتورهای لنتی ویروسی ناقص از نظر اینتگراز می‌تواند ابزار مفیدی برای بیان ژن به صورت گذرا و کارامد باشد. به این ترتیب، معایب هدف قرار دادن ژن با ویروس طبیعی حذف می‌گردد.