اندازه‌گیری آنتی‌بادی تولید شده علیه کپسول پلی ساکاریدی پلی ریبوزیل ریبیتول فسفات استخراج شده از هموفیلوس آنفلوانزای تیپ b سویه‌ی محلی atf2 با روش enzymelinked immunosorbent assay (elisa)

مقدمه: هموفیلوس آنفلوانزای تیپ b (hib یا haemophilus influenza b) یک ارگانیزم کپسول‌دار و عامل اصلی مننژیت در کودکان در جهان می‌باشد. آنتی‌ژن کپسول پلی‌ساکاریدی hib یک پلیمر تکراری از ریبوزیل ریبیتول فسفات و مهم‌ترین عامل ویرولانس و مسبب عفونت‌های بسیار در کودکان زیر 5 سال به خصوص کودکان زیر 2 سال می‌باشد. کپسول پلی‌ساکاریدی کانژوگه با یک حامل پروتئینی، در جلوگیری از چنین عفونت‌هایی بسیار موثر است.روش‌ها: در این مطالعه، hib سویه‌ی atf2 جدا شده از یک کودک مبتلا به مننژیت، در فرمانتور حاوی محیط اصلاح شده‌ی giolitti-cantoni broth (gc broth) کشت داده شد. کشت حاصل، بعد از غیر فعال شدن با استفاده از روش‌های مختلف تخلیص و آنتی‌ژن پلی‌ساکاریدی (prp یا polyribosylribitolphosphate) تهیه شده بعد از عبور از فیلتر 25/0 میکرومتری با توکسوئید کزاز (tt یا tetanus toxoid) به عنوان حامل پروتئینی کونژوگه گردید. محصول کونژوگه، پس از عبور از ژل سفارز cl-4b جداسازی شد و به عنوان محصول کونژوگه prp-tt مورد استفاده قرار گرفت.یافته‌ها: مقدار prp موجود در محصول کونژوگه 402 میکروگرم از 109 باکتری در هر میلی‌لیتر تخلیص شد. مقدار پروتئین و اسیدنوکلئیک موجود در prp مطابق با مقدار توصیه شده توسط world health organization (who) زیر 1 درصد بود. بازیافت prp موجود در محصول کونژوگه بعد از استفاده از sodium deoxycholate (doc)، 58 درصد بود که نشان دهنده‌ی مقدار بالای اتصال prp و پروتئین اولیه بود. پاسخ آنتی‌بادی علیه محصول کونژوگه (prp-tt) تهیه شده در نوزاد رت با نژاد ویستار با روش enzyme-linked immunosorbent assay (elisa) غیر مستقیم اندازه‌گیری و بالاترین تیتر برای محصول کونژوگه نسبت به prp استخراج شده در آزمایشگاه و prp استاندارد خریداری شده از موسسه‌ی بین‌المللی استانداردهای بیولوژی در لندن (national institute for biological standards and control یا nibsc) به دست آمد. در تیتر آنتی‌بادی به دست آمده برای prp تخلیص شده و خریداری شده از nibsc در غلظت برابر آنتی‌ژن و رقت 200/1 آنتی‌بادی شباهت زیادی دیده شد که این نشانگر خلوص prp تهیه شده در آزمایشگاه می‌باشد.نتیجه‌گیری: روش تخلیص prp، کونژوگاسیون و ایمنی‌زایی محصول کونژوگه در مدل حیوانی نوزاد رت روشی مقرون به صرفه و عملی با خلوص بالا است که می‌توان از آن درتولید واکسن hib با حجم بالا (scale up) استفاده کرد.