کلونینگ و بیان ژن muc1 در میزبان پروکاریوتی به منظور بکار گیری در تشخیص زود هنگام سرطان سینه

چکیدهزمینه و هدف: سرطان سینه دومین و شایع‌ترین علت مرگ در میان زنان جهان می‌باشد. غدد پستانی طبیعی و کارسینوماهای پستانی باید تحت کنترل عوامل نظارتی، فعال‌کننده‌ها و مهارکننده‌ها در داخل بافت سینه و همچنین یک سری فاکتورهای رشد، گیرنده‌ها و پروتیین‌ها در خارج از بافت سینه باشند. سطوح آنتی ژن‌های مرتبط با تومور می‌توانند به عنوان شاخص پیش‌بینی در درمان این بیماری استفاده شوند. از روش های نوین درمانی استفاده از آنتی بادی بر علیه آنتی ژن muc1 است که در 90? سرطان های سینه دارای افزایش بیان می باشد. muc1 سرطانی عملکرد e cadherinرا که یک مولکول موثر در چسبندگی سلولی است، مختل می‌سازد. هدف از این تحقیق تولید پروتیین نوترکیبmuc-1 به منظورتشخیص زود هنگام سرطان سینه می باشد.روش بررسی: بخشی از ژن muc-1 با طراحی پرایمر مناسب بوسیله ی pcr تکثیر شده و سپس درون ناقل پلاسمیدی pet28a جهت بیان در سیستم پروکاریوت کلون شد. پلاسمید pet28a به روش شوک حرارتی وارد e.coli bl21de3 گردید و فرآیند کلونینگ با روش های هضم آنزیمی و تعیین توالی مورد تایید قرار گرفت. باکتری حاوی پلاسمید نوترکیب با استفاده ازiptg القا شده و سپس بیان پروتیین توسط ژل sds-page بررسی شد. یافته ها: بخشی از ژنmuc-1 در پلاسمید مذکور کلون گردید و با روش های هضم آنزیمی و تعیین توالی تایید گردید. بیان ژن مورد نظر با استفاده از وسترن بلاتینگ تایید گردید.نتیجه گیری: بخشی از ژن muc-1 انسانی به صورت نوترکیب در باکتری e.coli تولید و تخلیص گردید که کاندید مناسبی برای تشخیص سرطان می باشد.واژگان کلیدی: کلونینگ ، muc1 ، بیان ژن، سرطان