شناسایی همزمان و مقایسه بروسلاهای بیماری زا در بین نمونه‌های سرمی و خون انسان به روش Multiplex PCR وتایید نتایج آن با روش PCR-RFLP

چکیده مقدمه: مطالعات کمی در خصوص جداسازی بروسلا آبورتوس و بروسلا ملی تنسیس عامل بروسلوزیس از سرم بیماران انجام است، این مطالعه با هدف جداسازی همزمان بروسلاهای بیماری زا از نمونه‌های سرمی انسان به روش multiplex pcr طراحی گردید.روش ها: در این مطالعه آزمایشگاهی، 50 نمونه خون و سرم بیمار مشکوک با علایم بالینی بروسلوزیس، پس از تیترسنجی به محیط کشت بروسلا اگار تلقیح شده و برای تشخیص، از تکنیک مولکولی multiplex-pcr با سه پرایمر استفاده شد. به منظور کشت نمونه‌های سرم، ml 5/0 از سرم در بروسلا براث تلقیح شده و به مدت 72 ساعت در انکوباتور 37 درجه سلسیوس و 5% گاز دی اکسید کربن، گرمخانه گذاری شد. برای تایید نتایج pcr، محصولات pcr با استفاده از آنزیم های برش دهنده taqi و rsai مطابق مطالعات قبلی تحت برش آنزیمی قرار گرفتند. یافته ها: از میان 50 نمونه خون 4 مورد (8%) کشت مثبت بودند که هر 4 مورد (100%) پس از بررسی خصوصیات و انجام تست های بیوشیمیایی و افتراقی به عنوان بروسلا ملی تنسیس شناسایی شدند. پس از انجام multiplex pcr، 9 مورد (18%) مثبت و 41 مورد (82%) منفی بودند. در میان موارد مثبت سرم، باند مربوط به بروسلا ملی تنسیس در 7 مورد (78%) و باند مربوط به بروسلا ابورتوس در 2 مورد (22%) مشاهده گردید. از مجموع 50 نمونه خون 5 مورد (10%) مثبت و 45 مورد (90%) منفی بودند که در تمامی آن‌ها (100%) باند مربوط به بروسلا ملی تنسیس مشاهده گردید. تمام نتایج با روش pcr_rflp تایید شد. نتیجه گیری: مطالعه ما نشان داد که این روش ساده و سریع بوده و حساسیت آن برای جداسازی بروسلاها (به خصوص بروسلا ابورتوس و ملی تنسیس) از سرم در مقایسه با خون کامل، بیشتر است.کلمات کلیدی: بروسلا، multiplex-pcr، سرم خون، pcr-rflp