بهینه سازی یک روش کالریمتری به منظور ارزیابی کمی آلکالین فسفاتاز برای تائید تمایز استخوانی سلول‌های بنیادی مزانشیمی

زمینه و هدف: ارزیابی میزان بیان آلکالین فسفاتاز جهت تائید تمایز سلول‌های بنیادی به استئوبلاست به عنوان یکی از مارکرهای تشخیصی شناخته شده است. روش‌های متعددی از جمله ایمونوسیتوشیمی جهت سنجش آلکالین فسفاتاز در تحقیقات مورد استفاده قرار می‌گیرد. با توجه به محدودیت‌های استفاده از این روش، هدف از این مطالعه، بهینه‌سازی روش کالریمتری به عنوان یک روش جایگزین، کم هزینه و کارآمد برای اندازه‌گیری کمی آلکالین فسفاتاز است. مواد و روش‌ها: سلول‌های بنیادی مزانشیمی از بافت چربی انسان گرفته شد. سلول‌ها با استفاده از محیط القایی به استئوبلاست تمایز داده شدند. سطوح آلکالین فسفاتاز در روز صفر و روز بیست و یک تمایز با دو روش ایمونوسیتوشیمی و روش کالریمتری بررسی شد. یافته‌ها: یافته‌های ایمونوسیتوشیمی، افزایش معناداری (تقریباً 5 برابر) در سطح بیان آلکالین فسفاتاز در روز بیست و یک تمایز در مقایسه با روز صفر نشان داد (p < 0.0001). همچنین نتایج آنالیز آماری تست کالریمتری، افزایش معناداری (تقریباً 9 برابر) در سطح بیان آلکالین فسفاتاز در روز بیست و یک تمایز در مقایسه با روز صفر نشان داد (p < 0.0001). نتیجه‌گیری: داده‌های مقایسه‌ای کالریمتری و ایمونوسیتوشیمی نتایج مشابهی را نشان داد. این یافته ها، استفاده از روش رنگ سنجی را به عنوان روش جایگزین، کمی، سریع و کم هزینه جهت تعیین سطح آلکالین فسفاتاز در استئوبلاست های تمایز یافته از سلول‌های بنیادی مزانشیمی پیشنهاد می‌کند. 

optimizing a calorimetric method for quantitative assessment of alkaline phosphatase to confirm the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cell

background and aim: evaluation of the alkaline phosphatase expression is known as one of the diagnostic markers to confirm the stem cells differentiation into osteoblasts. several methods, including immunocytochemistry, are used to measure alkaline phosphatase in different studies. due to limitations of using this method, we decided to optimize the calorimetric method as an alternative, low cost and efficient method for quantitative assessment of alkaline phosphatase.materials and methods: mesenchymal stem cells derived from human adipose tissue were used. cells were differentiated into osteoblasts using an induction medium. alkaline phosphatase levels were assessed on the days 0 and 21 of differentiation using both immunocytochemistry and calorimetric methods.results: immunocytochemistry findings demonstrated a significant increase (approximately 5-fold) in alkaline phosphatase expression level on the 21st day of differentiation compared to that on the day 0 (p <0.0001). also, statistical analysis of the results of the calorimetric test showed a significant increase (approximately 9-fold) in alkaline phosphatase expression level on the 21st day of differentiation compared to  that on the day 0 (p<0.0001). conclusion: comparison of the data between calorimetric and immunocytochemistry showed similar results. these findings suggested that colorimetric assay can be used as an alternative, quantitative, fast, and low cost method for determining the levels of alkaline phosphatase in osteoblasts differentiated from mesenchymal stem cells.