تولید ایمونوگلوبولین مرغی (igy) علیه پروتئین نوترکیب ltb از اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک ( etec) و ارزیابی اثر محافظتی آن در مدل حیوانی

زمینه و هدف: اشرشیاکلی انتروتوکسیژنیک یکی از رایج‌ترین عوامل باکتریایی مولد اسهال در جهان است. از مهم‌ترین فاکتورهای حدت‌زا etec) enterotoxigenic escherichia coli)، می‌توان به زیر‌‌ واحد b توکسین حساس به حرارت اشاره کرد که قسمت اتصالی توکسین را شکل می‌دهد. در مطالعه پیش رو آنتی‌بادی مرغی علیه پروتئین نوترکیبlymphotoxin beta (ltb)  تولید و اثر محافظتی آن در مدل حیوانی مورد آزمایش قرار گرفت.مواد و روش‌ها: 100 میکروگرم پروتئین نوترکیب ltb به صورت داخل عضلانی به مرغ‌ها تزریق شد. تیتر آنتی‌بادی در سرم مرغ‌ها اندازه‌گیری و تخم‌مرغ‌ها جمع‌آوری و(igy) immunoglobulin y  ها از زرده تخم‌مرغ با کمک سدیم کلراید تخلیص و تیتر آنتی‌بادی با روش elisa بررسی شد. توانایی igy در ممانعت از عملکردlt توکسین بر سلول‌هایy1 در رقت‌های متفاوت igy سنجیده شد. به منظور بررسی اثر باکتری تیمار شده با igy بر سلول‌های اپیتلیال روده، از روش استاندارد لوپ ایلئال استفاده گردید.یافته‌ها: القاء بیان پروتئین منجر به تولید ltb نوترکیب با وزن تقریبی 14 کیلو دالتون شد. غلظت پروتئین تخلیص شده 4/5 میلی‌گرم بر میلی لیتر بود. با ایمن‌سازی مرغ‌ها تیتر آنتی‌بادی سرمی افزایش یافت. آنتی‌بادی مرغی علیه پروتئین ltb با غلظت 12 میلی گرم بر میلی‌لیتر از زرده تخم مرغ تخلیص شد. igy علیه پروتئین نوترکیب ltb در رقت 125 میکروگرم بر میلی‌لیتر اثرات توکسین حساس به حرارت lt بر سلول‌های y1 را خنثی کرد. در تست لوپ ایلئال خنثی سازی توکسین با رقت 1/5 میلی‌گرم بر میلی‌لیترigy، مانع از عملکرد توکسین در روده شد. تجمع مایع درون لوپ 74/8درصد در مقایسه با لوپ های کنترل کاهش یافت.نتیجه‌گیری: نتایج به دست آمده بیانگر آن است که می‌توان از آنتی‌بادی مرغی اختصاصی علیه پروتئین نوترکیب ltb به عنوان آنتی‌بادی پیشگیرانه جهت جلوگیری از عملکرد توکسین حساس به حرارت باکتری etec استفاده نمود.

production of egg yolk immunoglobulin (igy) against recombinant ltb of enterotoxigenic escherichia coli (etec) and evaluation of its protective effect in animal model

background and purpose: enterotoxigenic escherichia coli is one of the most common bacterial causes of diarrhea worldwide. one of the most important etec colonization factors is b subunit of the heat labile enterotoxin, which forms the connecting part of the toxin. in the present study, egg yolk immunoglobulin (igy) was produced and its effectiveness against recombinant ltb protein was tested on the animal model.material and methods:hens were injected intramuscularly with 100 μg of recombinant ltb protein. the antibody titer was estimated and the eggs were collected. the water soluble part of the yolk was separated and the antibody titer was subsequently estimated by elisa.effecacy of different concentrations of igy on nutralising the effect of lt toxin on y1 cells was also studied. in order to investigate the effect of igy-treated bacteria on intestinal epithelial cells, the standard ileal loop  technique was used.results:protein expression led to the production of recombinant ltb showing molecular weight of 11 kda on sds page. immunization of hens induced serum antibody rise. the purified antibody was 144 mg per 12 ml of egg yolk. purified igy exhibited significant effect against recombinant ltb proteinat the concentration of 125 μg per ml, the igy could prevent the effects of heat labile enterotoxin on y1 cells. in the ileal loop test, 1.5 mg / ml igy neutralized the toxin effect of ltb   on the intestine. the accumulation of fluid in the test loops decreased by 74.8% compared to the untreated control loops.conclusion:the results showed that specific egg yolk immunoglobulin was effective against recombinant ltb protein and can be used as a preventive antibody to inhibit the heat labile enterotoxin function of etec bacteria.