بررسی مولکولی کاندیدا آلبیکنس جدا شده از عفونت‌های پریودنتال و تاثیر عصاره جلبک سارگاسوم بر بیان ژن بیو فیلم Als با روش Real-Time-Pcr

زمینه و هدف: کاندیدا، پاتوژن فرصت طلبی است که در افراد با سیستم نقص ایمنی و تضعیف شده ایجاد بیماری می کند. بیماری های پریودنتال، حالت التهابی و مخرب کمپلکس دندانی لثه ای است که رشد بیوفیلم ناشی از گونه های کاندیدا گلابراتا، پاراپسیلوزیس و تروپیکالیس نسبت به کاندیدا آلبیکنس در آن کمتر است. جلبک قهوه ای سارگاسوم به علت داشتن منشاء طبیعی نسبت به داروهای شیمیایی سازگاری بیشتری باانسان دارد و عوارض جانبی کمتری ایجاد می کند. هدف مطالعه حاضر بررسی مولکولی گونه های کاندیدا جدا شده از عفونت های پریودنتال و تاثیر عصاره جلبک قهوه ای sargassum glaucescens بر بیان ژن تشکیل دهنده بیوفیلم با روش real-time-pcr بود. روش بررسی: نمونه های دهانی عفونت پریودنتال از بیماران مراجعه کننده جمع آوری شد. جهت ایزولاسیون گونه های کاندیدا از نمونه ها روی محیط سابورو دکستروز آگار حاوی کلرامفنیکل (sdac) کشت شد. از کلنی های رشد یافته با روش کیت و پرل شیشه ای استخراجdna انجام شد. کلنی های رشد یافته با پرایمرهای اختصاصی به روش pcr-rflp شناسایی گردید. به منظور شناسایی بیان ژن های als در ایزوله های کاندیدا استخراج rna با روش فنل کلروفرم و پرل شیشه ای و برای ارزیابی تاثیر عصاره سارگاسوم گلسیسنس از دستورالعمل clsi-m27a2 استفاده شد. یافته ها: نتایج حاصل نشان داد که میزان بیان ژن als در عفونت پریودنتال در سنین مختلف نسبت به سایر ژن ها بیشتر است. نقش دیگر alsدر تشکیل بیوفیلم کاندیدا آلبیکنس است. حداقل غلظت مهارکنندگی رشد قارچ توسط عصاره جلبک 256 میکروگرم بر میلی لیتر بود. سارگاسوم گلوسنس حدود 62% بیان ژن als را در نمونه های مورد بررسی کاهش داد.نتیجه گیری: سارگاسوم گلوسنس دارای ویژگی های خاص فارماکولوژیک و اثرات ضد قارچی و ضد میکروبی قابل توجهی است. بررسی نتایج با روشreal time pcr نشان داد که بیان ژن als در ایزوله های تحت مطالعه تیمار شده با عصاره جلبک سارگاسوم نسبت به ایزوله های تیمار نشده پایین تر بوده و نشان دهنده نقش مثبت عصاره در کاهش بیان ژن مولد بیوفیلم در ایزوله ها بود.

Molecular study of Candida albicans isolated from periodontal infections and effect of Sargasum alga extract on biofilm als gene expression using Real-Time-PCR

Background and Aims: Candida is an opportunistic pathogen that causes illness in people with a defective or weakened condition. Infectious diseases (periodontal diseases) are inflammatory and malignant inflammation of the dentalgum complex, in which the growth of biofilms caused by Candida glabrata, Parapseilosis and Tropikalis is less than Candida albicans. Brown algae Sargasum is more compatible with human medicines due to having a natural origin than chemical drugs and has less side effects. The aim of the present study was to investigate the molecular characteristics of Candida species isolated from periodontal infections and the effect of Sargassum glaucescens extract on biofilm gene expression using RealTimePCR.Materials and Methods: Oral samples of periodontal infection were collected from the referred patients. To isolate the candidate species, the specimens were cultured on a Sabouraud dextrose agar containing chloramphenicol (SDAc). The extracted DNA was extracted from colonies grown from Kit and Glass pearl. Grown chickens were identified by specific primers by PCRRFLP method. In order to detect the expression of als genes in Candida isolates, RNA extraction was performed using PhenolChloroform and Pearl glass, and the CLSIM27A2 method was used to evaluate the effect of Sargasum glaucescens extract of algae.Results: The results showed that the expression of als gene in periodontal infection is higher than other genes. Another role is als in the formation of Candida albicans biofilm. The minimum inhibitory concentration of fungal growth was 256 mu;g/ml by algae extract. Sargasum glaucescens reduced the expression of als gene expression by about 62% in the sample.Conclusion: Sargasum glaucescens algae possesses specific pharmacological properties and antimicrobial and antimicrobial effects. The results of the study using Real Time PCR showed that expression of als gene in isolated studied with Sargasum algae extract was lower than untreated isolates. Thus, this indicated the positive role of treatment by sargasum glaucescens extract in reducing the expression of biofilm gene in isolates.