طراحی و مطالعه بیوانفورماتیکی ژن موتانت زیر واحد کاتالیتیک دیفتریاتوکسین (dtxA)و بررسی بیان پروتیین نوترکیب کاندید واکسن علیه دیفتری

چکیدهمقدمه:دیفتری ناشی از باسیل کورینه باکتریوم، بیماری مهلکی است که بقراط در 5 قرن قبل از میلاد آن را شرح داده است. عامل بیماری، اگزوتوکسین dtx، شامل دو زنجیره کاتالیتیک(a) و اتصال دهنده(b) می باشد. بخش a پس از ورود به سلول به واسطه اتصال بخش b که به بسیاری از سلول های بدن، باعث مهار سنتز پروتیین و مرگ سلول می گردد. هدف از این مطالعه طراحی و تهیه ژن موتانت زیرواحد کاتالیتیک دیفتریاتوکسین(dtxa) و بررسی های بیوانفورماتیکی آن به منظور بررسی بیان در وکتور pet28a و تولید پروتیین نوترکیب حاصل از آن، به عنوان کاندید واکسن علیه دیفتری می باشد. مواد و روش ها: پس از تعیین و بهینه سازی ترادف ژن dtxa واجد جهش های g52e / a158g و بررسی های بیوانفورماتیکی سازه ژنی dtxa pet28a/ به میزبان بیانی e.coli bl21 de3 منتقل گردید. سپس بیان و تولید پروتیین نوترکیب حاصل به عنوان کاندید واکسن، با کمک وسترن بلات مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته های پژوهش: نتایج بیوانفورماتیکی حاصل از بهینه سازی کدون های ژن مورد مطالعه منجر به سفارش و تهیه این ژن در وکتور بیانی گردید. صحت این ژن با کمک واکنش هضم آنزیمی و الکتروفورز، مورد تایید قرار گرفت. پس از آن بیان و تولید این پروتیین نوترکیب با وسترن بلات تایید گردید. بحث و نتیجه گیری: با توجه به مزیت های پروتیین نوترکیب dtxa به توکسویید دیفتری، به نظر می آید پروتیین نوترکیب حاصل می تواند جایگزینی مناسب به عنوان کاندید واکسن علیه دیفتریاتوکسین قرار گیرد که نیازمند مطالعات بیشتر می باشد.