ارزیابی کارایی ماتریس تمایلی حاصله از واریانت بهبودیافتۀ پپتید s3 در حذف اندوتوکسین از مادۀ دارویی فعال استرپتوکیناز و مقایسۀ عملکرد آن با ستون‌های تجاری

مقدمه: اندوتوکسین یا همان لیپوپلی‌ساکارید (lps) یکی از اجزای دیوارۀ باکتری‌های گرم منفی است که در صورت تماس با خون، باعث تحریک دستگاه ایمنی و باعث بروز تب و حتی عوارض نامطلوب جدی یا مرگ می‌شود. حذف اندوتوکسین از مهم‌ترین چالش‌های فرایند تخلیص در تولید داروهای زیستی نوترکیب است. اندوتوکسین باکتریایی (lps) در برابر گرما مقاوم است و از فیلترهای سترون‌کننده نیز عبور می‌کند و به علت عوارض خطرناک آن در موجود زنده، همواره بخشی از مراحل تخلیص پروتئین هدف به حذف این عامل مزاحم از محصول مربوط است.مواد و روش ها: از ماتریس‌ تمایلی s3e3-s-sepharose که از تثبیت واریانت‌ بهبودیافتۀ پپتید ضدمیکروبی s3 موسوم به پپتید s3e3 بر روی رزین کروماتوگرافی سفاروز تولید شده است، برای حذف اندوتوکسین از مادۀ دارویی فعال استرپتوکیناز استفاده گردید و عملکرد این ماتریس با عملکرد ماتریس تجاری یک‌بارمصرف دارای لیگاند s3 و رزین تعویض یونی مقایسه شد.یافته های پژوهش: نتایج بیان‌کنندۀ این بود که ماتریس s3e3-s-sepharose در مقایسه با ماتریس تمایلی تجاری بر پایۀ لیگاند s3 و کروماتوگرافی تعویض یونی، از بازده بازیابی پروتئین بیشتر (07/84 درصد در مقایسه با 50/81 درصد و 31/75 درصد) و بازیابی فعالیت بیولوژیک بیشتر (95/81 درصد در مقابل 27/76 درصد و 54/61 درصد) برخوردار بود.بحث و نتیجه‌گیری: نتایج نشان می‌دهد که ماتریس s3e3-s-sepharose برای استفاده در فرایندهای تخلیص مادۀ دارویی فعال استرپتوکیناز و سایر داروهای زیستی نوترکیب، کاندیدای مناسبی به‌نظر می‌رسد.

evaluation of the performance of affinity matrix produced from improved variants of s3 peptide to remove endotoxin from active pharmaceutical ingredient of streptokinase and comparison with commercial matrices

introduction:  endotoxin or lipopolysaccharide (lps) is one of the components of the wall of gram-negative bacteria, which, when in contact with blood, stimulates the immune system and causes fever and even serious adverse effects or death. removing endotoxin is one of the most daunting challenges presented to the purification process in the production of recombinant biological drugs. bacterial endotoxin (lps) is resistant to heat and passes through sterilizing filters, and due to its dangerous side effects in living organisms, part of the target protein purification process is always related to removing this disturbing factor from the product.materials & methods: the affinity matrix s3e3-s-sepharose, which was produced by immobilizing the improved variant of antimicrobial peptide s3 called s3e3 peptide on sepharose chromatography resin, was used to remove endotoxin from active pharmaceutical ingredient (api) of streptokinase, and the performance of this matrix was compared with the performance of a disposable commercial matrix (containing s3 peptide as its ligand) and with ion exchange chromatography resin.results: the statistical analysis of the results revealed that compared to commercial s3 matrices and ion exchange chromatography, the s3e3-s-sepharose matrix had higher protein recovery (84.07% compared to 81.50 and 75.31%, respectively) and higher streptokinase biological activity recovery (81.95% vs. 27 76.76 and 61.54%, respectively).conclusion: as evidenced by the obtained results, the s3e3-s-sepharose matrix seems to be a suitable candidate for use in the purification processes of streptokinase api and other recombinant biopharmaceuticals.