سنتز نانوذرات تری‌متیل کایتوزان حاوی پروتئین نوترکیب blf1-stxb باکتری burkholderia pseudomallei و بررسی ایمنی‌زایی آن در موش سوری

مقدمه: باکتری بورخولدریا سودومالئی عامل بیماری میلوئیدوزیس است. blf1 نقش مهمی در بیماری­زایی و ایجاد عفونت توسط بورخولدریا سودومالئی دارد. stxb نقش ادجوانتی و حاملی را داراست و می توان با ممزوج کردن آنتی ژن های کاندیدای واکسن با این ادجوانت، به تولید واکسن مناسب پرداخت. هدف این تحقیق ساخت و ارزیابی ایمنی‌زایی نانوذرۀ تری‎متیل کایتوزان حاوی پروتئین blf1-stxb به‌صورت تزریق زیرجلدی است. مواد و روش ها: در این مطالعه، بیان پروتئین نوترکیب blf1-stxb در میزبان بیانی القا و پروتئین به روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص شد؛ سپس ساخت نانوذره به روش ژلاسیون یونی صورت گرفت و اندازه و شکل ظاهری نانوذره توسط میکروسکوپ الکترونی انجام و به‌صورت زیرجلدی در چهار نوبت به موش تزریق گردید. ارزیابی تیتراسیون آنتی‎بادی به روش الایزای غیرمستقیم صورت گرفت. برای بررسی ایمنی‌زایی از سم blf1 استفاده شد. یافته‌ها: نتایج این تحقیق نشان داد که نانوذرات حاوی پروتئین نسبت به نانوذرات بدون پروتئین، اندازه، pdi بالاتر و پتانسیل زتای پایین‌تر دارند. میزان بارگذاری پروتئین در نانوذره در حدود 65 درصد بود. بالاترین تیتر آنتی‌بادی مربوط به گروه دریافت‌کنندۀ پروتئین بدون نانوذره بود. نتایج چالش حفاظت 75 درصد گروه موشی دریافت‌کنندۀ پروتئین بدون نانوذره را نشان داد. بحث و نتیجه‌گیری: این تحقیق نشان داد که گونۀ نانوذرۀ حاوی این پروتئین نوترکیب در مقایسه با گونۀ بدون نانوذره، به‌صورت تزریقی به بروز پاسخ ایمنی ضعیف‌تری منجر می‎شود. نتایج چالش نشان داد که این پروتئین کایمر نوترکیب در حالت تزریق زیرجلدی همراه ادجوانت، حفاظت مناسب‌تری را ایجاد می‎کند. 

synthesis of trimethyl chitosan nanoparticles containing recombinant blf1-stxb protein of burkholderia pseudomallei and evaluation of its immunogenicity in mice

introduction: the bacterium burkholderia pseudomallei is the cause of melioidosis disease. blf1 plays an important role in the pathogenesis and infection of b. pseudomallei. stxb has an adjuvant and carrier role and can be produced by mixing vaccine-candidate antigens with this adjuvant to produce a suitable vaccine. this study aimed to construct and evaluate the immunogenicity of trimethyl chitosan nanoparticles containing blf1-stxb protein by subcutaneous injection.material & methods: in this study, the expression of recombinant blf1-stxb protein was induced in the expression host, and the protein was purified by affinity chromatography. then, nanoparticles were fabricated by ion gelation method and the size and shape of nanoparticles were assessed by electron microscopy and injected subcutaneously into mice four times. antibody titration was evaluated by indirect elisa. blf1 toxin was used for immunogenicity.(ethic code: 6272)findings: the results of this study showed that protein-containing nanoparticles have higher size and pdi, and lower zeta potential than protein-free nanoparticles. the protein charge in nanoparticles was about 65%. the highest antibody titer belonged to the group receiving protein without nanoparticles. the results showed a 75% conservation challenge of the nanoparticle-free protein group.discussion & conclusion: this study showed that the nanoparticle form containing this recombinant protein leads to a weaker immune response, compared to the non-nanoparticle form by injection. the results of the challenge showed that this recombinant chimeric protein provides better protection when subcutaneously injected with an adjuvant.