بهینه‌سازی کشت سلول‌های دندریتیک نابالغ از سلول‌های مغز استخوان موش در شرایط عاری از اندوتوکسین

مقدمه: سلول‌های دندریتیک در مطالعات پایه و همچنین تحقیقات دربارۀ واکسن بسیار اهمیت دارند؛ اما جداسازی و کشت این سلول‌ها به علت تعداد اندک در بافت‌ها، با چالش‌هایی روبروست. با توجه به اینکه روش استانداردی وجود ندارد، در این پژوهش، به برخی از عوامل موثر در افزایش بازدهی جداسازی سلول‌های دندریتیک از مغز استخوان موش balb/c پرداخته‌شده است.مواد و روش‌ها: پس از جداسازی سلول‌های مغز استخوان از فمور و تیبیا و هم‌جواری با سایتوکاین gmcsf، در روز سوم، نیمی از سلول‌ها به پلیت جدید انتقال داده و در روز پنجم، از اولیگونوکلئوتید cpg برای تحریک سلول‌ها استفاده شد. در روزهای پنجم و هفتم، بقای سلول‌ها و همچنین شاخص‌های فنوتیپی cd11c، mhcii و cd86 با فلوسایتومتری بررسی گردید.یافته‌های پژوهش: در این مطالعه مشخص شد که حضور اندوتوکسین در مراحل کشت سلول‌های نابالغ، به‌طور معنی‌دار (p<0.05) سبب کاهش بازیابی سلول‌های دندریتیک می‌شود. علاوه بر این، تعداد کمتر از یک میلیون سلول در پلیت‌های غیرچسبنده سبب بقای بیشتر و بازدهی بالا می‌گردد. انتقال سلول‌ها در روز سوم به پلیت جدید هم به‌عنوان راهکاری برای جلوگیری از بلوغ زودرس سلول‌های دندریتیک و مرگ ناشی از آن معرفی شد. پس از دست‌یابی به سلول‌های نابالغ در مجاورت gmcsf، می‌توان برای القای مسیر th1 از اولیگونوکلئوتید cpg در روز هفتم استفاده کرد. اختلاف معنا‌دار (p<0.05) با کنترل نشان داد که cpg می‌تواند به‌عنوان محرک در القای بلوغ پس از تیمار با gmcsf به‌کار گرفته شود.بحث و نتیجه گیری: بهینه‌سازی کشت سلول‌های دندریتیک به لحاظ شرایط مختلف کشت، نقش مهمی در بازدهی بازیابی این سلول‌ها دارد.

Optimized Mouse BMDC Isolation and Culture under Endotoxin-Free Conditions

Introduction: Dendritic cells are very important in basic studies and vaccine research, but isolation and culture of these cells face challenges due to their small number in tissues. Since there is no standard method, we addressed some of the factors affecting the efficiency of dendritic cell isolation and culture from BALB/c mouse bone marrow. Materials Methods: Bone marrow cells isolated from femur and tibia, were seeded in plates and treated with GMCSF. On day 3, half of the media was transferred to a new plate with fresh media plus GMCSF. On day 5, cells were induced with CpG oligonucleotide. Cell survival as well as maturation markers of CD11C, MHCII and CD86 were investigated by flow cytometry on day 5 (immature cells) and day 7 (mature cells).Ethics code: IR.PII.REC.1395.99 Findings: It was found that the presence of endotoxin in the culture of immature cells, significantly reduces the recovery of dendritic cells (p value <0.05). Less than one million cells seeded in nontreated 6well plates and transfer of cells to a new plate on day 3 increased the efficiency of immature cell retrieval by preventing early maturation and premature death. Further treatment of immature cells with CpG on day 7 was used to induce the Th1 pathway. Significant difference (p value <0.05) with control group showed that CpG induces maturation after treatment with GMCSF (without IL4). Discussion Conclusions: Optimization of dendritic cell culture in terms of different culture conditions highly impacts the efficiency of immature cell formation and maturation.