بررسی میزان بیان ژن‌ Id1 در سلول ‌های Ags ترنسفکت شده با وکتور نوترکیب Pflag-Cmv3-Tagd

مقدمه: پروتئین id، باعث افزایش تکثیر سلولی می شود و از طرفی تمایز را مهار کرده که ارتباط آن با روند تومور زایی روده را مشخص می کند. عفونت هلیکوباکتر با بیان ژن های مختلف id در ارتباط است و بنا بر این هدف از این تحقیق بررسی بیان ژن id1 در سلول های ags ترانسفکت شده با وکتور نوترکیب pflagcmv3tagd است. مواد و روش ها: در پژوهش حاضر سلول های ags در محیط کشت rpmi1640 حاوی درصد سرم جنین گاوی رشد داده شد. این سلول ها با دو پلاسمید pflagcmv3tagd یا pflagcmv3 ترانسفکت شدند و سلول های دریافت کننده پلاسمید با افزودن 600 میلی گرم در لیتر g418، انتخاب گردیدند. سپس rna کل سلول با استفاده از محلول rnxplus تخلیص شد و سنتز cdna با کمک کیت انجام شد. سطح بیان mrna ژن id1 به روش qrt pcr و با کاربرد پرایمرهای مناسب بررسی شد. در نهایت با استفاده از نرم افزار spssو آزمون ‌های آماری ttest indepent بیان هر یک از ژن ها مورد بررسی قرار گرفت.یافته های پژوهش: با روش rtpcr، بیان موفقیت آمیز ژن tagd هلیکوباکتر پیلوری در سلول های ags تایید شد. آنالیز بیان ژن نشان داد که بیان ژن id1 به صورت معنی ‌داری در سلول های ags تیمار شده با tagd نسبت به سلول های کنترل، کاهش یافته است(p=0.0113). بحث و نتیجه گیری: تحقیق حاضر نشان داد که بیان ژن id1 در سلول های تحت تیمار با ژن tagd هلیکوباکتر پیلوری، تغییر می یابد و به نظر می رسد، ژن tagd هلیکوباکتر پیلوری در ایجاد این تغییر بیان نقش داشته باشد.

Evaluation of the Expression of ID1 Gene in AGS Cells Transfected with pFLAG-CMV3-tagD Recombinant Vector

Introduction: The ID protein enhances cell proliferation and inhibits differentiation, which determines its association with the process of intestinal tumorigenesis. Helicobacter infection is associated with the expression of different ID genes. This study aimed to investigate the expression of the ID1 gene in AGS cells transfected with the pFLAGCMV3tagD recombinant vector. Materials Methods: In the present study, AGS cells were cultured in the RPMI1640 medium containing 10% bovine fetal serum. Subsequently, these cells were transfected with two pFLAGCMV3tagD or pFLAGCMV3 plasmids. Moreover, the plasmid recipient cells were selected by adding 600 mg/LG418. Following that, wwholecell RNA was purified using RNXPlus solution, and the cDNA was synthesized using a kit. The mRNA expression level of ID1 was assessed using qRT PCR with appropriate primers. Eventually, the expression of each gene was evaluated in SPSS software through an independent ttest. Ethics code: IR. IAU.SHK.REC.1399.026 Findings: The results of RTPCR confirmed the successful expression of the helicobacter pylori tagD gene in AGS cells. Moreover, the gene expression analysis showed that the ID1 gene expression was significantly decreased in tagDtreated AGS cells, compared to the control cells (P=0.0113). Discussions Conclusions: The present study showed that the ID1 gene expression was altered in cells treated with the helicobacter pylori tagD gene. In addition, it seems that the helicobacter pylori tagD gene is involved in this expression change.