مطالعه تجربی بیان Ki67، Pou5f1 و Zbtb16 در سلول های بیضه خوک و موش با استفاده از روش ایمنوسیتوشیمیایی و Rt-Pcr

مقدمه: سلول های بنیادی اسپرم ساز، بنیانگذار و نقطه شروع اسپرماتوژنز هستند و تنها سلول های بنیادی در بدن به شمار می آیند که می توانند از طریق گامت زایی اطلاعات ژنتیکی را به نسل بعدی منتقل کنند؛ هدف از تحقیق حاضر، بررسی ماهیت پرتوانی سلول های بنیادی اسپرم ساز در شرایط in vitro و in vivo است.مواد و روش ‌ها: سلول های اسپرم ساز از بیضه خوک و موش با استفاده از روش هضم آنزیمی استخراج شده و در محیط حاوی fgf، egf و gdnf و سلول های تغذیه کننده sto کشت داده شدند. سپس برای بررسی ایمنوسیتوشیمیایی و rtpcr کلونی های حاصله از مارکرهای ki67، pou5f1 و zbtb16 استفاده شد.یافته ‌های پژوهش: ماهیت سلول های بنیادی اسپرماتوگونی حاصله پس از جداسازی و کشت، به وسیله معیار هایی نظیر رشد خوشه ای کلنی ها در محیط کشت، بیان مارکر ki67 طی بررسی ایمنوسیتوشیمیایی که بیانگر قابلیت تکثیر است و شاخص های مورفولوژیکی مشاهده شده با میکروسکوپ الکترونی نگاره، ثابت شد. هم چنین آنالیز مقایسه بیان مارکر های pou5f1 و zbtb16 در سلول های بنیادی جنینی، سلول های بنیادی اسپرم ساز و سلول های سرتولی موجود در لوله اسپرم ساز موش با استفاده از روش rtpcr را در نشان داد.بحث و نتیجه گیری: طی این پژوهش بیان مارکر هایki6 ، pou5f1 و zbtb16 در لوله اسپرم ساز و ویژگی های سیتولوژیک سلول های بنیادی اسپرم ساز مورد مطالعه قرار گرفت به طوری که یافته های حاصل می تواند در تحقیقات پیشرفته حوزه بیولوژی تولید مثل مفید باشد.

Experimental Investigation of Ki67, POU5F1, and ZBTB16 Expression in the Pig and Mouse Testicular Cells using Immunocytochemistry and RT-PCR

Introduction: Spermatogonial Stem Cells (SSC) are the originators and beginning points of the spermatogenesis process. Moreover, they are considered the only stem cells in the body that could transfer genetic information to the next generation through gametogenesis. This study aimed to investigate the potency and power of SSC under in vitro and in vivo conditions. Materials Methods: Enzymatic digestion technique was utilized to extract the spermatogonial cells of the pig and mousechr('39')s testis. They were then cultured in an environment containing FGF, EGF, GDNF, and a feeder layer of STO. For immunocytochemistry and RTPCR analysis, Ki67, POU5F1, and ZBTB16 markers were used to evaluate the resulted colonies. Ethics code: Ir.ausmt.rec.1398.03.07 Findings: The nature of the SSC resulted after separation and culture was proved through measures, such as cluster growth of the colonies in the culture medium, Ki67 marker expression in the immunocytochemistry review which showed the duplication ability, and the morphological criteria observed by an electron microscope. Moreover, the comparative expression of POU5F1 and ZBTB16 markers in the embryonic stem cells, SSC, and Sertoli cells within the seminiferous tubules of the mouse was analyzed by RTPCR. Discussions Conclusions: This experimental study investigated the expression of Ki67, POU5F1, and ZBTB16 in the seminiferous tubules and special cytological features of SCC. The findings are beneficial for future advanced studies in reproductive biology fields.