اندازه گیری پارامترهای سینتیکی استیل کولین استراز مغز گاو و مهار آنزیم در مجاورت عصاره کوتکوته (.mentha pulegium l)

مقدمه: عملکرد آنزیم استیل کولین استراز، تسریع فرآیند هیدرولیز استیل کولین است و حافظ هموستاز این انتقال دهنده عصبی، در سیستم اعصاب مرکزی و محیطی می باشد. با توجه به این که در بیماری هایی هم چون آلزایمر سطح انتقال دهنده عصبی، استیل کولین کاهش می یابد، بنا بر این امروزه یکی از روش های جلوگیری از پیشرفت این بیماری تجویز داروهای مهارکننده آنزیم استیل کولین استراز می باشد. دستیابی به داروهایی با اثرات جانبی کمتر به خصوص با منشاء گیاهی هدف بسیاری از محققین می باشد. ﻫﺪف از اﻧﺠﺎم ایﻦ ﭘﮋوﻫﺶ بررسی تاثیر عصاره متانولی برگ گیاه کوتکوته بر میزان ﻓﻌﺎﻟﯿﺖ آنزیم استیل کولین استراز می باشد.مواد و روش ها: در این پژوهش آنزیم استیل کولین استراز از مغز گاو با استفاده از روش های هموژنیزاسیون، سانتریفیوژ، رسوب دهی با آمونیوم سولفات و دیالیز در دمای 4 درجه سانتی گراد، به صورت نسبی جداسازی شد. سرعت تولید تیوکولین از استیل تیوکولین یداید به روش المن اندازه گیری شد. در ادامه عصاره متانولی برگ گیاه کوتکوته به روش خیساندن تهیه گردید. سپس اثر مهاری عصاره بر روی آنزیم استیل کولین استراز مورد سنجش قرار گرفت.یافته های پژوهش: در این تحقیق فعالیت کل و فعالیت ویژه استیل کولین استراز جداسازی شده از مغز گاوu 1143.78 و u/mg 4.10 تعیین شد.ph بهینه آنزیم 7.5 و دمای بهینه آن 45 درجه سانتی گراد به دست آورده شد. مقادیر km و vmax آنزیم به ترتیب برابر 6.49 میلی مولار و 59.88 میلی مولار بر دقیقه به دست آورده شد. بحث و نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که عصاره متانولی در غلظت mg/ml26.66 اثرات قابل توجهی بر فعالیت این آنزیم دارد. با توجه به نتایج به دست آمده، این عصاره می تواند به صورت مهار مختلط باعث مهار ache شود. بنا بر این برگ گیاه کوتکوته می تواند توسط محققان در زمینه مطالعه و بررسی داروها مورد توجه قرار گیرد.

Evaluation of Kinetic Parameters of Acetylcholinesterase from the Bovine Brain and its Inhibition with Mentha pulegium L. Extract

Introduction: The function of acetylcholinesterase accelerates the acetylcholine hydrolysis process and protects the hemostasis of this neurotransmitter in the central nervous system and the peripheral tissues. Due to the fact that in diseases, such as Alzheimerchr('39')s disease, the level of acetylcholine is reduced, the administration of acetylcholinesterase inhibitor drugs (AChEID) is one of the methods for preventing the progression of this disease. The majority of the researchers attempted to investigate drugs with lower side effects, especially from herbal sources. The aim of this study was to investigate the effect of methanol extract of Mentha pulegium leaves on the enzyme activity of AChE. Materials Methods: In this study the AChE enzyme was partially isolated from the bovine brain using homogenization, centrifugation, ammonium sulfate precipitation, and dialysis at 4 ordm;C. The rate of production of thiocholine from acetylthiocholine iodide was measured according to Ellmanchr('39')s method. Subsequently, the methanolic extract of Mentha pulegium leaves was prepared by the maceration method. Then the inhibitory effect of the extract on the AChE was measured. Ethics code: IR.umz.rec 1397.090 Findings: The total activity and specific activity of the partially purified AChE were determined as 1143.78 U and 4.10 U/mg, respectively. The optimum pH and temperature of the acetylcholinesterase were determined to be 7.5 and 45 °C respectively. Moreover, the Km and Vmax of this enzyme were estimated at 6.49 mM and 59.88 mM/min. Discussion Conclusions: The results of this study showed that the methanolic extract with a concentration of 26.66 mg/ml had significant effect on the activity of this enzyme. According to the results, this extract can inhibit the AchE in form of mixed inhibition. Therefore, Mentha pulegium leaf could be considered by the researchers in study and investigation of pharmaceutics.