زیر همسانه سازی و بیان آنتی ژن کایمر c-cftx1-stxb زهر عروس دریایی و بررسی آنتی ژنیسیتی آن در موش سوری

مقدمه: گزش عروس دریایی جعبه ای دردناک بوده و می تواند مهلک باشد. زهر گونه c. fleckeri حاوی انواع پروتئین های فعال زیستی است. دو مورد از فراوان ترین پروتئین های موجود در این گونه، cftx-1 و cftx-2 است که با استفاده از روش الکتروفورز یا کروماتوگرافی به راحتی قابل جداسازی نمی باشند. فناوری بیان نوترکیب، جایگزینی مناسب برای جداسازی پروتئین طبیعی زهر می باشد. هدف از این مطالعه، بیان پروتئین c-cftx1-stxb در e.coli و بررسی آنتی ژنیسیتی آن در موش سوری می باشد.مواد و روش ها: ژن کامل c-ftx-1 صناعی در پلاسمید puc57 تهیه شد. قطعه c-ftx-1 c به وسیلهpcr تکثیر و با جایگاه های آنزیمی bamhi وsali در وکتور بیانی pet28a-stxb زیر همسانه سازی و به باکتری e.coli ترانسفورم شد. بیان ژن تحت القایiptg انجام گردید. پس از تخلیص پروتئین و تزریق به موش سوری، میزان آنتی بادی تولید شده در سرم اندازه گیری شد. هم چنین موش ها به وسیله زهر عروس دریایی rhopilema nomadica چالش شدند.یافته های پژوهش: در این مطالعه تجربی، ژن c-cftx1-stxb، کلون شده در وکتور بیانی pet28a(+) به وسیله pcr، توالی یابی و با آنالیز آنزیمی تایید گردید. هم چنین پروتئین نوترکیب تولید شده به وسیله وسترن تایید شد. آنتی بادی تولید شده در سرم، توسط تست الایزا کمیت سنجی شد.بحث و نتیجه گیری: موش های ایمن شده در چالشی پس از 60 روز، 50 برابر ld50 زهر عروس دریایی را تحمل می نمایند. با توجه به عدم خاصیت کاردیوتوکسیستی و نوروتوکسیستی پروتئین نوترکیب، این پروتئین تولید شده می تواند به عنوان کاندید واکسن زهر عروس دریایی در موش سوری یا در مراحل بعدی کارآزمایی بالینی برای انسان پیشنهاد شود.

Subcloning and Expression of the Chimeric Antigen C-CFTX1-STxB of the Jellyfish Venom and its Antigenicity Assessment in Syrian Mice

Introduction: Box jellyfish stings are painful and may be lifethreatening. The venom of Chironex fleckeri contains a variety of bioactive proteins as well as two of the most abundant proteins, namely CfTX1 and CfTX2 which cannot be isolated easily using electrophoresis or chromatography techniques. Recombinant expression technology may offer an alternative to the isolation of native C.fleckeri venom protein. This study aimed at expressing CCfTX1STxB protein in Escherichia coli and assessing its antigenicity in Syrian mice. Materials Methods: Synthesis of the artificial CfTX1complete gene was prepared in plasmid pUC57. The Ccftx1 was cloned using a polymerase chain reaction (PCR) and subcloned with BamHI and SalI restriction enzyme sites in pET28astxB expression vector and transformed into E.coli. Gene expression was artificially induced by Isopropyl beta; d1thiogalactopyranoside. After the purification of the protein and its injection into the Syrian mice, the amount of produced antibody was measured in the serum. The rats were also challenged by the venom of the jellyfish (i.e., Rhopilema nomadic). Findings: In this experimental study, the CCfTX1STxB gene was cloned in the expression vector pET28a (+), sequenced by PCR, and analyzed by enzymatic analysis. Moreover, the produced recombinant protein was confirmed by Western blotting. The produced antibody in the serum was quantified using an enzymelinked immunosorbent assay. Discussion Conclusions: After 60 days, the immunized mice tolerated 50x LD50 of jellyfish venom. Considering the ineffectiveness of cardiotoxicity and neurotoxicity of the recombinant protein, this produced protein can be suggested as a jellyfish venom vaccine candidate in Syrian mice or at a later stage of a clinical trial in humans.