بررسی اثر مایع آمنیوتیک انسانی بر بقا و تکثیر رده‌های سلولی میلومای انسانی rpmi8226 و u266 در مقایسه با سرم جنین گاوی

زمینه و هدف: بیماری مالتیپل میلوما یک بدخیمی مربوط به پلاسماسل می باشد. از آنجا که مطالعه ی مکانیسم های بیماری زایی و مسیرهای پیام رسان دخیل در سلول های عامل ایجاد بیماری در محیط آزمایشگاهی و نزدیک به محیط فیزیولوژیک بدن مهم می باشد؛ بنابراین بهترین محیط برای مطالعه ی سلول ها در محیط آزمایشگاهی، محیطی با بیشترین شباهت به محیط فیزیولوژیک بدن می باشد. این در حالی است که استفاده از سرم جنین گاوی (fbs) به عنوان مکمل رشد سلول ها در فرآیند کشت سلولی بسیار رایج می باشد؛ بنابراین هدف این مطالعه تاثیر مایع آمنیوتیک در تکثیر (ki-67 و cyclin-d) و بقاء (bax و bcl2) دو رده میلومایی rpmi8226 و u266 در مقایسه با سرم جنین گاوی می باشد.روش کار: مایع آمنیوتیک انسانی از 6 خانم باردار در حین عمل سزارین و بصورت استریل جمع آوری شد. پس از کشت رده های سلولی میلوما (rpmi8226 و u266)، تیمار رده های سلولی در چهار گروه با نسبت های متفاوت مایع آمنیوتیک انجام شد. 48 و 96 ساعت پس از تیمار، شمارش سلولی و بررسی حیات سلول ها با استفاده تریپان بلو و لام نئوبار انجام گرفت. هم چنین تست mtt جهت بررسی زنده مانی سلول های میلومایی تیمار شده انجام گرفت و در نهایت میزان بیان ژن های ki67، cyclin-d1، bax و bcl-2 توسط تکنیک real time pcr و به روش sybr green مورد ارزیابی واقع شد.یافته ها: بررسی میزان بیان ژن های دخیل در فرآیند تکثیر و آپوپتوز سلولی نشان داد که در گروه های مورد مطالعه تحت تیمار با مایع آمنیوتیک، افزایش معنادار بیان ژن های ki67، cyclind1 و همچنین افزایش بیان ژن آنتی آپوپتوتیک bcl2 و در مقابل کاهش معنادار بیان ژن مسئول آپوپتوز، bax مشاهده شد. داده های ما نشان می دهد مایع آمنیوتیک به عنوان یک منبع مغذی می تواند رشد و تکثیر سلول ها را تا 96 ساعت به صورت معناداری نسبت به سرم جنین گاوی افزایش دهد، هرچند که میزان تکثیر و بقای سلولی در 48 ساعت نسبت به 96 ساعت پس از کشت بیشتر می باشد.نتیجه گیری: بنا بر یافته های این مطالعه می توان از مایع آمنیوتیک به عنوان حامی رشد به عنوان جایگزینی برای سرم جنین گاوی تا 96 ساعت استفاده نمود. در این مطالعه تاثیر این مایع بر دو رده سلولی میلومایی ارزیابی گردید که به نظر می رسد بهتر است برای نتیجه گیری جامع تر در این مورد بر سلول های دیگر نیز مورد آزمون واقع شود.

The effect of human amniotic fluid on the survival and proliferation of human myeloma cell lines RPMI8226 and U266 in comparison with the fetal bovine serum

Background: Multiple Myeloma is a Plasma Cell Malignancy. Since the study of pathogenicity mechanisms and messenger pathways involved in the causative agent cells is important in the laboratory environment and close to the physiological environment of the body, therefore, the best environment for the study of cells in the laboratory environment, an environment most closely resembling the physiological environment of the body. However, the use of fetal bovine serum (FBS) as a supplement to the growth of cells in the cell culture process is very common. Therefore, the aim of this study was to investigate the effect of amniotic fluid on proliferation (Ki67 and CyclinD) and survival (Bax and Bcl2) of both RPMI8226 and U266 Myeloma in comparison with fetal bovine serum.Methods: Human amniotic fluid was collected from 6 pregnant women during cesarean section and sterilized. After cultivating myeloma cells (RPMI8226 and U266), cell line treatments were performed in four groups with different amniotic fluid ratios. 48 and 96 hours after treatment, cell count and cell survival were evaluated using trypan blue and neobar lam. MTT test was also used to assess the survival of the treated Myeloma cells. Finally, Ki67, CyclinD1, Bax and Bcl2 genes were evaluated by Real Time PCR and SYBR Green.Results: Evaluation of the expression of the genes involved in the process of cell proliferation and apoptosis showed that the amniotic fluid treated groups significantly increased the expression of Ki67, CyclinD1 genes and also increased the antiapoptotic gene expression of bcl 2, and a significant decrease in expression of the gene responsible for apoptosis, Bax was observed. Our data suggest that amniotic fluid as a nutrient source can increase cell growth and proliferation up to 96 hours significantly in comparison with that of fetal bovine serum, although cell proliferation and cell survival in 48 hours than 96 hours of more cultivation.Conclusion: Based on the findings of this study, ammonia fluid can be used as a supporter of growth as a replacement for bovine serum for up to 96 hours. In this study, the effect of this fluid on the two cell lines of myeloma was evaluated, which seems to be better tested for more comprehensive conclusions in this regard on other cells.