بیان کاست ژنی so6-stxb در باکتری اشرشیا کلی و بررسی تیترآنتی‌بادی

زمینه و هدف: یکی از راه های تقویت اثر واکسن ها استفاده از یاور ها می باشد. stxb باکتری شیگلا دارای نقش یاوری و حاملی بوده و می توان با ترکیب کردن آنتی ژن های کاندیدای واکسن با این یاور به تولید واکسن مناسب پرداخت. غاسول صابونی گیاهی دارای فعالیت انگلیکوزیداز می باشد. ایزوفرم 6 این گیاه (so6)، آدنین 4324 را در توالی حفاظت شده gaga در 28srrna پورین زدایی کرده و سنتز پروتئین را مختل می کند. هدف این مطالعه، بیان ژن so6stxb در باکتری اشرشیا کلی و بررسی تیتر آنتی بادی آن در موش می باشد.روش کار: در این مطالعه تجربی ژن so6 با جایگاه های آنزیمی bamhi و sali از پلاسمید puc57 جداسازی گردید و در وکتور بیانی pet28a(+) حاوی ژن stxb زیرهمسانه سازی و به باکتری اشرشیا کلی سویه bl21(de3) تراریخت شد. بیان پروتئین نوترکیب so6stxb توسط iptg القا و تخلیص به وسیله کروماتوگرافی تمایلی ستون نیکل انجام گردید. تایید پروتئین نوترکیب با استفاده از وسترن بلات انجام گرفت. موش ها به صورت صفاقی با پروتئین تخلیص شده واکسینه شدند و تیتر igg سرم به روش elisa مورد سنجش قرار گرفت.یافته ها: زیرهمسانه سازی ژن stxbso6 در وکتور بیانی pet28a(+) به وسیله واکنش pcr و هضم آنزیمی، تائید شد. پروتئین نوترکیب 5/37 کیلودالتونی تولید شده به وسیله sdspage و لکه گذاری وسترن تایید شد. سپس آنتی بادی تولید شده از سرم موش جداسازی و توسط الایزا اندازه گیری گردید.نتیجه گیری: آنتی ژن stxb-so6 نوترکیب تخلیص شده می تواند برای تحقیقات ضد سرطانی و کاندید واکسن استفاده شود.