ارزیابی و مقایسه تیتر آنتی بادی علیه پروتئین های نوترکیب منفرد، مخلوط و کایمر ctxb، tcpa و ctxb-tcpa

زمینه و هدف: وبا به عنوان بیماری اسهالی یکی از مهم ترین علل مرگ و ناتوانی در افراد جوامع مختلف به شمار می رود. فاکتور کلونیزاسیون پیلی tcpa و توکسین کلرا مهم ترین فاکتورهای بیماری زایی ویبریوکلرا می باشند. زیر واحد b سم کلرا (ctxb) و tcpa توانایی القای پاسخ های ایمنی را دارند. ﻫﺪف از ایﻦ ﻣﻄﺎﻟﻌﻪ، ﺗﻮﻟﯿﺪ پروتئین های نوترکیب ctxb ، tcpa و ctxb-tcpa و مطالعه ایمنی زایی و مقایسه تیتر آنتی بادی کایمر، مخلوط و جداگانه پروتئین ها ی نوترکیب در موش بود.روش کار: در این مطالعه تجربی، ژن هایctxb ،tcpa و کایمر ctxbtcpa در وکتورهای بیانی (+) pet28a و (+) pet32a همسانه سازی و پلاسیمدهای نوترکیب به coli bl21 de3. e منتقل شدند. بیان پروتئین های نوترکیب با iptg القا و با روش sdspage و وسترن بلاتینگ بررسی شد. جهت تخلیص پروتئین نوترکیب از کروماتوگرافی تمایلی ni-nta استفاده شد. ایﻤن سازی موش ها ﺑﻪ روش درون صفاقی و زیر پوستی انجام شد. ﺗﯿﺘﺮ آنتی بادی در سرم موش های ایمن شده ﺑﺎ روش اﻻیﺰا ﻣﻮرد ارزیﺎﺑﯽ ﻗﺮار گرفت.یافته ها: آنالیز sds page و وسترن بلاتینگ، بیان و تخلیص پروتئین های نوترکیب را تائید کرد. میزان پروتئین های خالص شده ctxb، tcpa و ctxbtcpa به ترتیب 15.570، 11.533 و 33.100 میلی گرم در لیتر بود. نتایج الایزا نشان داد که ایمنی زایی موش ها به خوبی صورت پذیرفته است. تفاوت معنی داری در تیتر آنتی بادی علیه آنتی ژن ها ی ctxb-tcpa و مخلوط tcpa با ctxb وجود نداشت. همچنین ﺗﻔﺎوت معنی داری در ﺗﯿﺘﺮ آنتی بادی حاصل از تزریق درون صفاقی و زیرپوستی مشاهده نشد.نتیجه گیری: اﺧﺘﻼف جزئی در ﺗﯿﺘﺮ آنتی بادی پروتئین ها ﻣﻤﮑﻦ اﺳﺖ ﺑﻪ ﻃﻮل ﻋﻤﺮ سلول های ﺧﺎﻃﺮه ﺣﺎﺻﻠﻪ در ایﻦ گروه ها و همچنین روش تزریقی آن ها ارﺗﺒﺎط داشته باشد. با توجه به مزیت های پروتئین های کایمر، ctxb-tcpa می تواند جایگزین مناسبی برای مخلوط پروتئین ها جهت تحریک سیستم ایمنی باشد.