بررسی مورفولوژی و ایمونوفنوتیپ سلولهای بنیادی مزانشیمی بعد از تعویض سرم گاوی محیط کشت به سرم انسانی

مقدمه: سلولهای بنیادی مزانشیمی ( msc ) برای مقاصد سلول درمانی مورد استفاده قرار می گیرند. سرم جنین گاوی (fbs) برای رشد سلولهای بنیادی در محیط کشت ضروری می باشد. از آنجائیکه ممکن است fbs واکنشهای ایمونولو یک را در افراد گیرنده msc تحریک کند و یا باعث انتقال عوامل پاتو ژن یک گردد. لذا در موارد بالینی بایستی fbs از سلولها حذف گردد. این مطالعه مشخصات سیتولوژیک و فلوسیتومتریک سلولهای بنیادی مشتق از چربی( ascs) را در مدیومهای حاوی fbs، سرم انسانی و جایگزینی fbs با سرم انسانی و برعکس مورد ارزیابی قرار خواهد داد. مواد و روشها: سلولهای بنیادی مشتق از چربی بعد از جداسازی کشت داده شدند. جهت بررسی سیتولوژیک سلولهای پاساژ دوم بر روی لامل کشت داده شدند و بعد از فیکساسیون با هماتوکسیلین و ائوزین رنگ شدند. سلولهای پاساژ دوم با آنتی بادی های cd44 و cd90 رنگ آمیزیزمینه و هدف: سلول های بنیادی مزانشیمی (mesenchymal stem cellsmsc) برای مقاصد سلول درمانی مورد استفاده قرار می گیرند. سرم جنین گاوی (fetal bovine serumfbs) برای رشد سلول های بنیادی در محیط کشت ضروری می باشد. از آنجایی که ممکن است fbs واکنش های ایمونولوژیک را در افراد گیرنده msc تحریک کند و یا باعث انتقال عوامل پاتوژنیک گردد، لذا در موارد بالینی بایستی fbs از سلول ها حذف گردد و با سرم انسانی جایگزین گردد. این مطالعه مشخصات سیتولوژیک و فلوسیتومتریک سلول های بنیادی مشتق از چربی (ascs adipose tissue stem cells) را در مدیوم های حاوی fbs، سرم انسانی و جایگزینی fbs با سرم انسانی و برعکس مورد ارزیابی قرار داده است.روش کار: سلول های بنیادی مشتق از چربی بعد از جداسازی کشت داده شدند. جهت بررسی سیتولوژیک سلول های پاساژ دوم بر روی لامل کشت داده و بعد از فیکساسیون با هماتوکسیلین و ائوزین رنگ شدند. سلول های پاساژ دوم با آنتی بادی ها مثبت و منفیcd44 ، cd90 برای سلول های بنیادی، cd45 و cd11 رنگ آمیزی شده و مورد ارزیابی قرار گرفتند.یافته ها: سلول های بنیادی تکثیر یافته در fbs شکل پهنی داشته و به کندی تکثیر پیدا کردند در حالی که سلول های دارای سرم انسانی دوکی شکل بود و به سرعت رشد می کردند. تعویض سرم از fbs به سرم انسانی باعث تغییر شکل سلول ها از پهن به دوکی گردید. در نتایج forward scatter سلول های بنیادی کشت داده شده در fbs به طور معنی داری بزرگ تر از سایر گروه ها بودند (05/0 p<). تفاوت معنی داری در بیان مارکرهای ایمونوفنوتیپیک مثبت و منفی مشاهده نشد.نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان دهنده این است که سرم انسانی، شرایط کشت سلول های بنیادی مزانشیمی را در مقایسه با مدیوم حاوی fbs قابل دسترس تجاری ، بهبود می بخشد. تعویض fbs به سرم انسانی روش مفید برای سلول های بنیادی خواهد بود که قبلاً در fbs کشت داده شده و یا فریز گردیده اند.ده و مورد ارزیابی قرار گرفتند. نتایج: سلولهای بنیادی تکثیر یافته در fbs شکل پهنی داشته و به کندی تکثیر پیدا کردند در حالیکه سلولهای دارای سرم انسانی دوکی شکل بود و به سرعت رشد می کردند. تعویض سرم از fbs به سرم انسانی باعث تغییر شکل سلولها از پهن به دوکی گردید. در نتایج forward scatter سلولهای بنیادی کشت داده شده در fbs بطور معنی داری بزرگتر از سایر گروهها بودند(p<0.05). تفاوت معنی داری در بیان مارکرهای ایمونوفنوتیپیک مثل cd44, cd90 مشاهده نشد. نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشاندهنده این است که سرم انسانی، شرایط کشت سلولهای بنیادی مزانشیمی را در مقایسه با مدیوم حاوی fbs قابل دسترس تجاری، بهبود می بخشد. تعویض fbs به سرم انسانی روش مفید برای سلولهای بنیادی خواهد بود که قبلاً در fbs کشت داده شده و یا فریز گردیده اند.