بررسی اثر مهاری سلول‌های بنیادی مزانشیمی بافت چربی بر روی تکثیر سلول‌های تک هسته‌ای طحالی موش دیابتی C57bl/6 در محیط آزمایشگاه

زمینه و هدف: دیابت نوع یک، نوعی بیماری خودایمنی محدود به عضو با واسطهلنفوسیت‌های t می‌باشد که درآن تخریب ایمونولوژیک سلول‌های بتای پانکراس موجب کاهش انسولین و در نتیجه افزایشقند خون می‌گردد. یکی از راه‌های درمان علاوه بر تزریق روزانه انسولین، پیوندآلوژنیک جزایر پانکراس است که در صورت عدم استفاده از داروهای سرکوب کننده ایمنیبا تخریب مجدد و رد پیوند مواجه خواهد شد. از آن جایی که مصرف مداوم این داروهاتوسط بیماران اثرات جانبی متعددی را به همراه دارد، ما برای حل این مشکل خاصیتموضعی مهار ایمنی توسط سلول‌های بنیادی مزانشیمی را پیشنهاد می‌کنیم.هدف از انجام این طرح بررسی اثر ایمونومدولاتوری سلول‌های بنیادی مزانشیمی بافتچربی موش در مهار پاسخ سلول‌های تک‌هسته‌ای طحالی علیه جزایر پانکراس موش سینژنیکدر محیط آزمایشگاه می‌باشد.روش کار: در این مطالعه سلول‌های مزانشیمی از بافت چربی موش سالم استخراج، کشت،تکثیر و تعیین هویت شده و خاصیت تمایزی آن‌ها به دو رده استئوسیت، آدیپوسیت اثباتگردید. پس از تهیه مدل دیابتیموشهایc57bl/6  با تزریق دوزهای پایین و متوالیاسترپتوزوتوسین و تایید آن با قند خون بالای mg/dl 300، هیستوپاتولوژی پانکراس و کاهش معنی دار انسولین، جزایرپانکراس از موش سالم و سلول‌های تک هسته ای طحالی از موش سالم و دیابتی استخراجگردید. برای اثبات خاصیت ضد تکثیری سلولهای مزانشیمی، پس از همکشتی آنها باسلولهای طحالی در حضور لایزیت جزایر پانکراس، سنجش تکثیر سلولهای تک هسته ای طحالیبا تکنیک mtt ارزیابی شد. داده ها در هر آزمایش حاصل سه بار تکرار مستقل و به صورت mean± sd گزارش شده است و با تست آماری one way anova آنالیز گردیدند.یافته‌ها: نتایج حاصله نشان داد که سلولهای مزانشیمی قادرند در حضورتحریک کننده اختصاصی (لایزیت جزایر پانکراس) باعث کاهش معنی دار تکثیر سلولهایطحالی شوند (0.05>p).نتیجه‌گیری: بررسی اثرات تنظیم ایمنی و تمایزی سلولهای مزانشیمی به سلولهای ترشحکننده انسولین، می تواند در آینده افقی جدید را برای درمان دیابت تیپ یک ایجادنماید.

Assessing in vitro inhibitory effect of adipose-derived mesenchymal stem cells on C57BL/6 diabetic mouse splenocytes proliferation

Background: Type 1 diabetes (T1D) is a Tcell mediated autoimmunedisorder in which pancreas betacell destruction causes insulin deficiency andhyperglycemia. In addition to daily insulin treatment, allogeneic islettransplant inT1D is another therapeutic way that needs immunosuppressive drugsto control autoimmune damage and graft rejection. Since lifelong applicationof these drugs is associated with serious sideeffects, we proposed localimmunomodulatory effect of mesenchymal stem cells (MSCs). The aim of this studywas to investigate in vitro inhibitory influence of adiposederived MSCs onC57BL/6 diabetic mouse splenocytes proliferation against syngeneic islet cellslysate. Methods: MSCs were extracted from abdominal fat tissue ofhealthy C57BL/6 mouse and cultured to prolipherate. Then, they wereimmunophynotyped and their differentiation to osteo and adipocyte wasapproved. Diabetic C57BL/6 mouse model was prepared by administration ofconsecutive lowdoses of sterptozotocin and diabetic state was confirmed by serumglucose (>300 mg/dL) and insulin levels, and pancreas histopathology.Pancreas islets were isolated from healthy mouse and splenocytes prepared fromhealthy and diabetic mice. To evaluate antiproliferative effect of MSCs, theywere cocultured with splenocytes in the presence of islet lysate andproliferation was assayed by MTT technique. The presented data are mean SD andstatistically analyzed with one way ANOVA.Results: Extraction and identification (Immunolphenotyping anddifferentiation) of MSCs had acceptable outcome.Diabetic state was confirmedinour model (blood glucose: 300±20 vs. 95±10 Insulin level: 4.9±0.5 vs 0.3±0.1and lack of Langerhans islets in tissue sections). The coculture experimentsdemonstrated that MSCs significantly decreased diabetic splenocytesproliferation in the presence of islet cells lysate (p<0.05).Conclusion: MSCs can effectively inhibit autoimmune response ofdiabetic splenocytes against islet cells lysate. Assessing MSCsimmunomodulatory effects and differentiation property to insulinproducingcells may provide a new horizon for T1D treatment in the future.