کلون و بیان ژن flic به‌عنوان کاندیدای واکسن علیه بیماری تیفوئید

پیش زمینه و هدف: سالمونلا انتریکا یک پاتوژن زئونوز است که می تواند باعث تب تیفوئید در انسان و حیوان شود. این باکتری یکی از علل مهم عفونت های ناشی از مواد غذایی در انسان در سراسر جهان است. از مطالعات اخیر تخمین زده می شود که سالانه حدود 22 میلیون مورد ابتلا به این بیماری گزارش می شود که از این تعداد 200 هزار نفر را به کام مرگ می کشاند. فلاژلینی که توسط flic کد می شود نقش مهمی در بیماری زایی دارد و می تواند به عنوان آنتی ژنی قوی در واکسن مورداستفاده قرار گیرد. این مطالعه باهدف تولید پروتئین نوترکیب flic به عنوان یکی از کاندیداهای واکسن علیه بیماری سالمونلوز انجام شد.مواد و روش کار: توالی پروتئین flic از پایگاه داده ncbi اخذ شد. برای بیان حداکثری، ژن موردنظر با توجه به ترجیح کدونی e. coli ساخته شد. ژن سنتتیک از وکتور puc57 به وکتور بیانی pet28a+ زیرهمسانه سازی شد و سپس به میزبان e. coli bl21de3 تراریخت شد. پروتئین نوترکیب با القاء iptg بیان شد. برای بیان حداکثری، سه پارامتر شامل غلظت iptg، زمان و دما بهینه سازی گردید. پروتئین نوترکیب حاوی histag به وسیله ستون کروماتوگرافی تعویض یون ni-nta agarose خالص سازی شد. پروتئین خالص شده با آزمایش وسترن بلات تائید شد.یافته ها: وکتور نوترکیب با واکنش pcr و نیز آنالیز آنزیم های تحدیدی تائید شد. آزمایش sds-page وجود یک پروتئین 51 کیلو دالتونی با خلوص مناسب را نشان داد. همچنین آزمایش وسترن بلات با آنتی بادی histag پروتئین مدنظر را تائید نمود.بحث و نتیجه گیری: امروزه استفاده از واکسن های نوترکیب بسیار موردتوجه قرار گرفته است. با توجه به اینکه در مطالعه حاضر ژن یکی از مهم ترین فاکتورهای بیماری زایی باکتری سالمونلا همسانه سازی و پروتئین مربوط به آن تولید و تخلیص شده است. این پروتئین می تواند به عنوان یکی از کاندیداهای مناسب در واکسن های نوترکیب علیه تیفوئید مورداستفاده قرار گیرد.

COLONING AND EXPRESSION OF FLIC AS A VACCINE CANDIDATE AGAINST TYPHOID

Background Aims: Salmonella enterica is a zoonotic pathogen causing typhoid fever in humans and animals. It is an important cause of food borne infections in humans throughout the world. A recent study estimated approximately 22 million cases of typhoid each year with at least 200,000 deaths. FliC encoding flagellin plays a role in pathogenesis and is an important antigen in vaccination. In this study, recombinant protein fliC as a candidate vaccine against salmonellosis was produced and purified.Materials Methods: The protein sequence of fliC was obtained from NCBI database. For high level expression of protein, the gene was synthesized with codon bias of E. coli.; synthetic gene in pUC57 was sub coloned into pET32 expression vector and then transferred into E. coli BL21DE3. The recombinant protein was express by IPTG induction. For high expression, three parameters including IPTG concentration, time and temperature of induction were optimized. The recombinant protein was purified by ion exchange chromatography with HisTag. The purified protein was confirmed by western blotting.Results: Recombinant vector was approved by PCR and restriction analysis. SDSPAGE showed a 51 kDa protein with proper purity and western blotting with histag antibody confirmed the intend protein.Conclusion: The use of recombinant vaccines is highly regarded, since one of the major virulence factors of Salmonella gene was cloned and the protein was produced and purified in this study. This protein can be used in candidate vaccine against typhoid.SOURCE: URMIA MED J 2016: 27(8): 691 ISSN: 10273727