بهینه سازی تولید پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب در اشرشیا کلی

پیش‌زمینه و هدف: رومیپلاستیم یک پروتئین پیوندی می‌باشد که در بدن عملکردی مشابه با پروتئین ترومبوپویتین دارد و بدین وسیله باعث تحریک مغز استخوان برای ساخت بیش‌تر پلاکت می‌شود. ترومبوپویتین هورمونی است که تولید پلاکت را کنترل می‌کند. داروی رومیپلاستیم در درمان ترومبوسیتوپنی در بیماران دارای ایمیون ترومبوسیتوپنی مزمن (itp) زمانی که سایر داروها مانند گورتیکواستروئیدها و ایمنوگلوبولین ها و یا عمل جراحی برداشتن طحال جواب نداده باشد، استفاده می‌شود. هدف از این مطالعه، کلونینگ و بهینه‌سازی شرایط بیان ژن و خالص‌سازی پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب در باکتری اشرشیا کلی بود.مواد و روش کار: در این مطالعه کاربردی، متغیرهای مستقل مورد استفاده شامل میزان od (0.4، 0.8 و 1.2) در طول موج 600 نانومتر، غلظت iptg (0.5، 1 و 1.5 میلی مولار) و نوع محیط کشت (lb, tb, m9) بودند که از روش سطح پاسخ (rsm (response surface methodology)) در قالب طرح مرکب مرکزی با نرم‌افزار design-expert 12 برای پیش‌بینی متغیرهای مستقل بر میزان تولید رومیپلاستیم استفاده گردید.یافته‌ها: میزان od برابر 0.8، غلظت iptg برابر 1 میلی مولار و محیط کشت lb بهترین حالت برای تولید پپتیبادی رومیپلاستیم نوترکیب بهینه سازی شد.بحث و نتیجه‌گیری: از آنجائیکه تولید بهینه پپتیبادی مورد نظر بود، کلونینگ و بهینه‌سازی شرایط بیان ژن و خالص‌سازی پپتیبادی رومیپلاستیم در سویه bl21 از باکتری اشرشیا کلی با بهینه‌ترین شرایط که توسط rsm انجام گردید، صورت گرفت. همچنین برای اینکه پروتئین به نحو صحیح فولد شود، از مرحله ریفولدینگ در ابتدای خالص‌سازی استفاده شد. پروتئین‌های دارویی نقش مهمی در درمان‌های نوین پزشکی مولکولی دارند.

optimization of production of recombinant romiplostim peptibody in escherichia coli

background & aim: romiplastim is a fusion protein that has the same function as thrombopoietin in the body and thereby, stimulates bone marrow to produce more platelets. thrombopoietin is a hormone that controls the production of platelets. romiplastim is used in the treatment of thrombocytopenia in patients with chronic immune thrombocytopenia (itp) when other drugs like corticosteroids and immunoglobulins or splenectomy have not treated them. the aim of this study was cloning and optimization of gene expression conditions and purification of recombinant romiplastim peptibody in escherichia coli bacteria.materials & methods: in this practical study, the independent variables used included the amount of ods (0.4, 0.8 and 1.2) at a wavelength of 600 nm, iptg concentration (0.5, 1 and 1.5 mm) and the type of culture medium (lb, tb, m9). the response surface methodology (rsm) was used in the form of central composite design with design-expert 12 software to predict independent variables on the amount of romiplastim production.results: od equal to 0.8, iptg concentration equal to 1 mm and lb culture medium were optimized for the production of recombinant romiplast peptibody.conclusion: since the optimal production of peptibody was desired, cloning and optimization of conditions of gene expression and purification of romiplastim peptibody in bl21 strain of escherichia coli bacteria were done with the most optimal conditions which were done by rsm. also, for correct folding of the protein, the refolding step was used at the beginning of the purification. medicinal proteins play an important role in modern molecular medicine treatments.