تولید و خالص‌سازی آنتی‌بادی پلی کلونال علیه مولکول cd166 خرگوش

پیش‌زمینه و هدف: cd166 یک مولکول چسبنده لکوسیت فعال‌شده (alcam) است و به‌عنوان مولکول چسبنده سلول به سلول عمل می‌کند. cd166 نقش مهمی در زنده ماندن، رشد و تهاجم سلول‌های سرطانی دارد. این پژوهش به‌منظور تهیه آنتی‌بادی پلی کلونال علیه آنتی‌ژن cd166 طراحی گردید.مواد و روش کار: پپتید انتخاب‌شده از مولکول cd166 سنتز شده و پس از کانژوگه شدن با پروتئین klh، در امولسیونی با ادجونت کامل فروند، به دو خرگوش ماده نیوزیلندی به‌صورت زیر جلدی و در چند نوبت تزریق شد. سپس آنتی‌بادی‌های موجود در سرم خرگوش با روش fplc تخلیص شده و مقدار آن با روش الیزای غیرمستقیم تعیین گردید. با روش خالص‌سازی ژل سیانوژن-بروماید، آنتی‌بادی‌های اختصاصی بر ضد پپتید cd166 متصل به klh جداشده، و غلظت آنتی‌بادی تولیدی علیه پپتید یا پپتید -klh با روش الایزا تعیین گردید.یافته‌ها: بعد از تزریق مکرر پپتید cd166 متصل به klh، آنتی‌بادی بر ضد پپتید cd166 تولیدشده ولی از تیتر پایینی برخوردار بود. بخش عمده‌ای از آنتی‌بادی تولیدی علیه قسمت اتصال پپتید–klh ساخته شده بود. همچنین تمایل آنتی‌بادی‌های تولیدی برای اتصال به پپتید–klh در مقایسه با پپتید به‌تنهایی بیشتر بود.بحث و نتیجه‌گیری: آنتی‌بادی‌های تولیدی، بیشتر بر ضد شاخص آنتی‌ژنی پپتید–klh بود. سنتتیک و کوچک بودن پپتید تزریق‌شده می‌تواند دلیلی برای کم بودن تیتر و میل اتصال آنتی‌بادی به آن باشد.

production and purification of rabbit anti-cd166 polyclonal antibody

background & aims: cd166 is an activated leukocyte cell adhesion molecule (alcam) which acts as a cell-to-cell adhesion molecule. cd166 has an important role in the growth, survival and invasion of the tumor cells. the aim of the present study was to produce polyclonal antibodies against cd166.materials & methods: the selected peptide was synthesized from the cd166 molecule and after conjugation with klh protein, in an emulsion with freund’s complete adjuvant, it was injected subcutaneously to two female new zealand rabbits several times. then the antibodies in rabbit serum were purified by fplc method and their amounts were determined by indirect elisa method. by cnbr gel purification method, specific antibodies against cd166 peptide bound to klh were isolated, and the concentration of produced antibody against peptide or klh-peptide was determined by elisa method.results: after repeated injection of cd166 peptide bound to klh, antibody against cd166 peptide was produced, but it had a low titer. most of the antibody produced was directed against the klh-peptide binding site. also, the tendency of produced antibodies to bind to klh-peptide was higher compared to the peptide alone.conclusion: the produced antibodies were mostly against the antigenic index of klh peptide. the synthetic and small size of the injected peptide can be the reason for the low titer and affinity of the antibody to it.