ایجاد سازواره ژنی برای حذف ژن sipa از باکتری سالمونلا تیفی موریوم: مطالعه آزمایشگاهی

پیش‌زمینه و هدف: باکتری سالمونلا تیفی موریوم یک باسیل گرم منفی، بدون اسپور، فاقد کپسول، متحرک و دارای فلاژل‌‌ها یکی از شایع‌ترین پری‌تریش است. سالمونلا عامل مسمومیت‌‌‌های غذایی می‌باشد. توانایی وارد شدن و زنده ماندن در سلول‌های میزبان شرط لازم برای بیماری‌زایی گونه‌های سالمونلا است. پروتئین تهاجمی سالمونلا یک فاکتور بیماری‌زایی مهم است که توسط باکتری به سلول‌های میزبان منتقل می‌شود. این مطالعه با هدف ساخت سازواره‌ی ژنی برای حذف ژن sipa از باکتری سالمونلا تیفی موریوم و کلون ‌سازی آن در باکتری اشریشیا کلی انجام گرفت. مواد و روش‌ کار: این مطالعه آزمایشگاهی از مهر 1396 تا خرداد 1397 در مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرکرد انجام گرفت. در این تحقیق توالی 5’ و 3’ ژن sipa به کمک پرایمرهای اختصاصی آن‌ها و روش pcr تکثیر گردید. سپس هرکدام از این توالی‌ها به روش t/acloning در حامل pgem-teasy کلون و سپس به باکتری اشریشیا کلی ترانسفورم گردید. با استفاده از روش pcr قطعات مربوط به هر ناحیه تکثیر و تایید گردید. تایید نهایی سازواره‌ی حاصل با استفاده از آنزیم‌های xbai و xhoi انجام گرفت. یافته‌ها: نتایج نشان‌دهنده‌ی کلون‌ سازی موفقیت‌آمیز ژن موردنظر در باکتری اشریشیا کلی و ساخت سازواره‌ی ژنی به طول 1520 جفت باز بود. همچنین حامل pet32 به طول 5900 جفت باز ازلحاظ ظرفیت پذیرش بهترین نوع حامل در پذیرش توالی سازواره بود.بحث و نتیجه‌گیری: با توجه به نتایج حاصل در این مطالعه به نظر می‌رسد که می‌توان با قرار دادن یک ژن، ژن آسیب‌زا را حذف و از آن به‌عنوان واکسن تضعیف‌شده علیه سالمونلوزیس مورد استفاده قرار نمود. به‌طوری‌که می‌توان با روش الکتروپوریشن این سازواره را وارد باکتری سالمونلا تیفی موریوم کرد و سپس به‌واسطه تشابه توالی‌ها‌ی فرادست و فرودست ژن sipa و kan نوترکیبی همولوگ بین این دو ژن اتفاق می‌افتد و ژن بیماری‌زا حذف خواهد شد.

generation of a gene construct to sipa gene deletion of salmonella typhimurium

background & aims: salmonella typhimurium is a negative-gram, non-spore, free capsule, moving bacteria with trish perry flagella. salmonella is the most common cause of food poisoning. the ability to enter and survive in host cells is the condition for pathogenic salmonella species. proteins of invasive salmonella are transferred to the host cells by bacteria. this study was performed for generation of a gene construct to sipa gene deletion of salmonella typhimurium and its cloning in e.coli bacteria.materials & methods: this laboratory study was conducted in biotechnology research center of islamic azad university shahrekord branch from september 2017 to may 2018. in this study, 5’ and 3’ sequence of sipa gene was amplified by the specific primers and pcr method. then, each of these sequences was cloned by the t/a cloning method in pgem-teasy vector and then was transformed into e.coli bacteria. using the pcr method, the part related to each region was amplified and confirmed. the final confirmation of the produced construct was performed by the xbal and xhol enzymes.results: the results indicated the successful cloning of the target gene in e.coli and generation of a gene construct with a length of the 1520 bp. also, pet32 vector with a length of 5900 bp was the best vector for the admission construct.conclusion: based on the results, it seems that by inserting a gene, the damaged gene can be deleted and it can be used in the future research as a gene vaccine against salmonellosis. also, the target gene can be deleted with electroporation method and transferred into salmonella typhimurium, and due to the similarities between upstream and downstream gene sequences of sipa and kan genes, homologous recombination between these two genes can occur and pathogenic genes will be removed.