ارزیابی بیان ژن‌های bax و bcl2 در آستروسیت‌های جداشده از بافت مغز انسان تحت اثر اگزوزوم‌های سرطان خون

پیش‌زمینه و هدف: تهاجم سرطان‌ها ازجمله لوسمی به سیستم عصبی مرکزی اتفاق می‌افتد، سلول‌های سرطانی ویژگی تکثیر و مقاومت در برابر آپوپتوز دارند. از طرفی اگزوزوم‌ها با ایجاد ارتباطات سلول به سلول موجب پیشرفت سرطان‌ها می‌شوند، در این مطالعه اثر اگزوزوم‌های سرطان خون بر بیان ژن‌های مرتبط با آپوپتوز در آستروسیت‌ها بررسی گردید.مواد و روش‌ کار: پس از کشت اولیه سلول‌های عصبی استخراج‌شده از بافت مغز، و ارزیابی ایمونوسیتوشیمی توسط آنتی‌بادی‌های nestin، sox2 و gfap، از روش تریپسیناژ جهت جداسازی آستروسیت‌ها استفاده گردید. اگزوزوم‌ها از محیط کشت رده‌ی nalm6 به روش اولتراسانتریفیوژ استخراج گردید و اثرات آن‌ها بر تکثیر و بیان ژن‌های bax و bcl2‌ به ترتیب توسط آزمون dapi و real time pcr‌ در آستروسیت‌ها بررسی گردید.یافته‌ها: نتایج ایمونوسیتوشیمی خلوص بالای 90درصد آستروسیت‌ها را نشان داد. آزمون dapi پس از گذشت 48 ساعت نشان‌دهنده‌ی افزایش معنادار آستروسیت‌ها تحت تیمار با اگزوزوم (µg/ml50) نسبت به گروه کنترل می‌باشد (0.001>p***). همچنین میزان بیان ژن‌های bax و bcl2‌ در آستروسیت‌های تحت تیمار با اگزوزوم به ترتیب نشان‌دهنده‌ی کاهش و افزایش معنادار نسبت به گروه کنترل بوده است (0.01>p ** و 0.05>p*).بحث و نتیجه‌گیری: اگزوزوم‌های سرطان خون موجب بر هم زدن تعادل در تکثیر آستروسیت‌ها و مهار آپوپتوز در آن‌ها با تغییر در بیان ژن‌های bax و bcl2‌ می‌گردند، بنابراین مطالعات بیشتر جهت شناسایی مسیرهای دقیق مولکولی دخیل در سرطان پیشنهاد می‌شود.

investigation of bax and bcl2 gene expression in astrocytes isolated from human brain tissue under the effects of leukemia exosomes

background & aims: unfortunately, today cancers such as leukemia metastasize to the central nervous system (cns). cancer cells proliferate and resist apoptosis features. on the other hand, exosomes promote cancer through cell-to-cell communication. this study investigated the effect of leukemia exosomes on the expression of apoptosis-related genes in astrocytes.materials & methods: after the primary culture of brain tissue cells, immunocytochemical evaluation of cells was performed by specific antibodies nestin, sox2, and gfap. then, astrocytes were purified from other cells by trypsinage. exosomes were extracted from supernatant of nalm6 cell line by ultracentrifugation and their effects on proliferation and expression of bax and bcl2‌ genes were assessed by dapi and real-time pcr‌ in astrocytes, respectively.results: results indicated a purity of over 90% of astrocytes in cell culture medium. dapi test after 48 hours showed a significant increase in astrocytes treated with exosome (50µg/ml) compared to the control group (p < 001). also, the expression of bax and bcl2‌ genes in exosome-treated astrocytes showed a significant decrease and increase compared to the control group (p <0.01 and p <0.05), respectively.conclusion: leukemia exosomes disrupt the balance of astrocyte proliferation and inhibit apoptosis in them by altering the expression of bax and bcl2 genes. therefore, further studies are recommended to identify exact molecular pathways of cancer.