تولید یک سویه جهش یافته مقاوم نسبت به شوری ESCHERICHIA COLI-MK148 و جدا سازی ژنهای باکتریایی بیوسنتز پرولین از آن

یکی از عوامل مهم در ایجاد مقاومت در برابر تنش های اسمزی خشکی و شوری در محیط تولید و تراکم ترکیبات محافظ اسمزی نظیر اسیدهای آمینه پرولین ، گلیسین و گلیسین بتائین ،‌ موادی نظیر پینیتول ، مانیتول و همچنین پروتئینهای hsp توسط سلولهای موجودات زنده می باشد . از طرفی مسیر بیوسنتز این ترکیبات در گیاهان و باکتریها دارای طرح مشابهی است . بنابراین با انتقال ژن های دست ورزی شده موثر در تولید این گونه مواد به گیاهان می توان لاین های ترانس ژن مقاوم به تنش اسمزی ایجاد نمود . در این تحقیق از پرتو دهی توسط اشعه گاما که دارای خاصیت تک فامی و نفوذپذیری انتخابی می باشد ، جهت ایجاد جهش در باکتری escherichia coli - mk 148 استفاده گردید . کلنی های مقاوم به شوری به دست آمده و جداسازی گردیدند . سویه های حاصل تا 600 میلی مولار نمک در محیط کشت را تحمل کرده و قادر به رشد وتولید مثل بودند . ایجاد مقاومت به شوری باید همراه با جهش در ژن مربوط به انزیم گلوتامیل کیناز باشد که اولین آنزیم در مسیر بیوسنتز پرولین است حساسیت آنزیم بعد از ایجاد جهش در ژن مربوط به ان نسبت به کنترل فیدیک توسط محصول انتهایی کاهش یافته است . ژنهای مربوط به آنزیم گلوتامیل کیناز prob و انزیم گلوتامیک سمی آلدئید دهیدروژناز proa توسط روش pcr از سویه مقاوم به شوری جدا شده و در پلاسمید puc 19 کلون شدند . این پلاسمید باعث رشد باکتریهای فاقد توانایی بیوسنتز پرولین در محیط فاقد پرولین و دارای شوری گردیدند .