تولید موتانت غیرسمی توکسین دیفتری در اشرشیاکلی در فرم محلول بر اساس فیوژن با تگ سومو و تنظیم شرایط ابراز ژن

پروتئین crm197 موتانت غیر سمی توکسین دیفتری است که بعنوان حامل در ساخت واکسنهای کنژوگه بکار میرود. تولید تجاری آن در در سویه corynebacterium diphtheriae c7 (β197)tox- دارای بازدهی پایین است. لذا تولید نوترکیب آن مورد توجه است.اشرشیاکلی میزبان متداول در تولید پروتئینهای نوترکیب است اما مشکل آن در ایجاد اینکلوژن بادی است. بنابراین در این مطالعه به بررسی امکان تولید crm197 در اشرشیاکلی در فرم محلول آن پرداخته میشود. برای این منظور پروتئین مذکور بصورت فیوژن با تگهای سومو و هیستیدین با استفاده از وکتور pet28a دز e. coli bl21(de3) بیان شد و درصد حلالیت پروتئین حاصل با استفاده از sds-page تعیین شد. نتایج ما نشان دادند که بیان پروتئین در فرم محلول بوده است و با کاهش دما به ºc 30 پروتئین تقریبا بطور کامل محلول بوده است. پس از تخلیص پروتئین با استفاده از تگ هیستیدین و حذف تگ سومو با پروتئاز سومو، پروتئین crm197 حاصل شد که دارای فعالیت نوکلئاز مورد انتظار بوده است. لذا به نظر میرسد روش ارائه شده در این تحقیق برای تولید پروتئین مذکور جهت استفاده های پزشکی مناسب باشد.

production of non toxic mutant of diphtheria toxin in escherichia coli in soluble form based on sumo tag fusion and adjusting expression conditions

crm197 protein is a non-toxic mutant of diphtheria toxin, which is used as a carrier in making conjugate vaccines. its commercial production in corynebacterium diphtheriae strain c7 (?197)tox- has low efficiency. therefore, its recombinant production is of interest. escherichia coli is a common host in the production of recombinant proteins, but its problem is in inclusion body production. therefore, in this study, the possibility of producing crm197 in escherichia coli in its soluble form is investigated. for this purpose, the mentioned protein was expressed as a fusion with sumo and histidine tags using the pet28a vector in e. coli bl21(de3) and the solubility percentage of the resulting protein was determined using sds-page. our results showed that the protein expression was in the soluble form, and by lowering the temperature to 30 ºc, the protein was almost completely soluble. after purifying the protein using histidine tag and removing the sumo tag with sumo protease, crm197 protein was obtained, which has the expected nuclease activity. therefore, it seems that the method presented in this research is suitable for the production this protein for medical use.