جداسازی و مشخصه یابی اگزوزوم از شیر گاومیش

مقدمه و هدف: اگزوزوم‌ها، نانووزیکول‌های طبیعی برون ‌سلولی هستند که در ارتباطات بین سلولی به وسیله جابه‌جایی مواد زیست‌فعال مثل پروتئین‌ها، microrna، mrna، dna و سایر مولکول‌ها نقش دارند. تاکنون اگزوزوم‌ها از شیر حیوانات مختلف از جمله گاو، شتر، الاغ، بز، اسب، گوسفند، خوک، موش و انسان، جداسازی شده است. هدف از این مطالعه جداسازی و مشخصه‌یابی اگزوزوم از شیر گاومیش استروش کار: برای جداسازی اگزوزوم از شیر گاومیش از روش سانتریفیوژ و استخراج با حلال استفاده گردید. برای این منظور شیر از گاومیش سالم در ابتدای دوره شیرواری از مرکز پروش گاومیش شمالغرب کشور تهیه و در شرایط کاملاً سرد به آزمایش منتقل گردید. برای جداسازی گلبول‌های چربی، بقایای سلولی و درشت پروتئین‌های همراه با شیر از جمله کازئین، نمونه‌ها به ترتیب تحت سانتریفیوژ 3000g به مدت 10 دقیقه، 9000g به مدت 30 دقیقه، 14000g به مدت 30 دقیقه و 21500g در دو مرحله به مدت 30 و 60 دقیقه قرار گرفتند. در ادامه جهت جداسازی سایر بقایای سلولی و میکروبی، نمونه از فیلترهای 0/22 و 0/45 میکرومتر عبور داده شد. در نهایت پلی‌اتیلن‌گلیکول (peg) به منظور رسوب‌دهی اگزوزوم‌ها به نسبت 1 به 5 با نمونه ترکیب گردید و پس از گذشت 12 ساعت در دمای 4 درجه سانتی‌گراد و سانتریفیوژ مجدد در 14000g به مدت 60 دقیقه، شناورسازی رسوب تشکیل شده با محلول نمک فسفات بافری (pbs) انجام شد. برای تائید و مشخصه یابی از میکروسکوپ الکترونی عبوری (tem) و zetasizer استفاده گردید. محتوای پروتئین به روش بردفورد بررسی گردید.یافته‌ها: اگزوزوم‌ها در tem به صورت ذرات نانوسفرها در اندازه زیر 50 نانومتر مشاهده گردید. توزیع اندازه ذرات نشان داد که اگزوزوم‌ها اندازه مختلفی بین 90 تا 105 نانومتر با قطر میانگین 102/8 نانومتر داشتند. در آزمون سنجش پروتئین برادفورد، مقدار پروتئین نمونه برابر با 2/17 میلی‌گرم در میلی‌لیتر بدست آمد.نتیجه‌گیری: امکان جداسازی اگزوروم از شیر گاومیش به روش سانتریفیوژ و استخراج با حلال وجود دارد و لازم است مطالعات تکمیلی در خصوص اثرات درمانی اگزوزوم شیر گاومیش انجام پذیرد.