جدا سازی و کلون سازی ژن map30گیاه momordica charantiaدر باکتری اشریشیا کلی

در این مطالعه استخراج dna از گیاه کارلا به روش دلاپورتا که یک روش ساده و آسان و سریع می باشد، صورت پذیرفت. کمیت و کیفیت dna استخراج شده به روش اسپکتروفتومتری و الکتروفورز ژل آگارز مورد بررسی قرار گرفت. پس از استخراج dna برای ژن map30 بر اساس توالی های گزارش شده در سایت ncbi پرایمر های اختصاصی طراحی گردید، و ژن به گونه ای تکثیر شد که امکان کلون آن در حامل های متعدد بوجود آید. map30 در وکتور ptg19.t کلون و به باکتری اشریشیا کلی سویه dh5α منتقل گردید. تایید ترانسفورماسیون به کمک روش های انتخاب آنتی بیوتیکی، کلنی های سفید و آبی و آنزیم bamh 1 صورت پذیرفت. نتایج حاصل از توالی یابی و آزمون های تائیدی جداسازی و کلون نمودن صحیح ژن map30 را تائید نمود.

isolstion and cloning of map30 gene of momordica charantia plant in escherichia coli

the purpose of this study was to isolate and clone the map30 gene in e. coli which can increase the universal expression of the protein map30. the product of this gene is used as a anti-cancer and anti-viral molecule in numerous researches. in the study, karela plant dna was extracted accoding to delapota et al. (1983) which is a feasible and economic method. the quantity and quality of the extracted dna was evaluated by spectrophotometry and agarose gel electrophoresis methods. dna amplification of map30 gene was designed based on the deposited sequences in the ncbi data base and the gene was amplified in such a way that possessing the potential for colonization in several vectores. the map30 gene was cloned in ptg19-t vector and transferred to dh5α e. coli competent cell employing heat- shock method. the transformation was confirmed by applying a selective media containing antibiotics. production of while colonies was the criterium for successful transformation while the blue colonies represent failure in the transformation process. the sequencing data and cloned dna segments verified the appropriate and functionel insertion of map30 gene in to the e. coli. the obtained bacterial clones with map30 gene in their plasmids are preserved for further researches dealing with map30 protein function.