طراحی و سنتز نیوزوم کاتیونی و بررسی میزان انتقال و بیان ژن nef-hiv در رده سلولی 293h

ویروس نقص ایمنی انسان یا hiv یکی از عمده ترین دالیل مرگ و میر در سراسر جهان است. استفاده از داروهای ضدویروسی تنها قادر است آمار مبتالیان ساالنه را تنها ٪18 کاهش دهند. هنوز هیچ درمان قطعی ای برای این بیماری وجود ندارد بنابراین بسیاری از دانشمندان و گروه های تحقیقاتی در تالش اند که با استفاده از روش های نوین واکسن های کارآمد و مقرون به صرفه ای را برای این ویروس طراحی و تولید کنند. هدف مطالعه ی حاضر طراحی و سنتز نانوذرات نیوزومی با خاصیت ادجوانتی برای انتقال پالسمید حاوی ژن nef از ویروس hiv می باشد. با توجه به ویژگی های منحصر به فردی که پروتئین nef دارد از آن در ساخت واکسن علیه ویروس hiv زیاد استفاده می شود و مطالعات زیادی در این زمینه صورت گرفته است. اما در این پژوهش برای اولین بار می باشد که از نیوزوم برای انتقال ژن nef به عنوان یک dna واکسن استفاده می شود. در مطالعه ی حاضر از روش ساخت فیلم لیپیدی با استفاده از روتاری نانوذرات نیوزومی ساخته شدند و برای سنجش میزان بارگیری dna توسط نیوزوم های کاتیونی از روش بازداری ژل الکتروفورز استفاده شد. اندازه و بار سطحی نانوذرات نیوزومی و نانوذرات نیوزومی حاوی dna پالسمیدی با استفاده از روش dls اندازه گیری شد. جهت بررسی کارایی انتقال ژن توسط نانوذرات نیوزومی به داخل سلول های یوکاریوتی از رده سلولی -293hek استفاده شد و میزان انتقال ژن با استفاده از روش فلوسایتومتری و مشاهده سلول های حاوی gfp توسط میکروسکوپ فلورسنت اندازه گیری شد. آزمون mtt برای بررسی سمیت نیوزوم های کاتیونی ساخته شده بر روی سلول -293hek استفاده شد و پایداری نانوذرات ساخته شده در حضور سرم و با استفاده از آنزیم dnase مورد بررسی قرار گرفت. سایز نیوزوم کاتیونی nm 76.03 و pdl 0.3 ، سایز و زتای نیوزوم خنثی0 میباشد. نیوزوم)ادجوانت( با مقادیر مختلفی از dna ترپ میشد و کمپلکس تشکیل میداد اما سلول ها فقط قادر به ترپ کردن مقادیر ،0/5 1 و 2 ماکروگرم dna بودند. ترنسفکشن)انتقال ژن به سلول( باالی ٪90 صورت گرفت. تست mtt نیز سمیتی نشان نداد. نتایج بدست آمده نشان داد که نیوزوم کاتیونی که میزان بار مثبت آن ها بیشتر است می تواند تا 2 میکروگرم dna را حمل کند و قادر به انتقال ژن به سلول های یوکاریوتی می باشد. برای بررسی کارایی انتقال ژن توسط نانوذرات نیوزومی ساخته شده و بررسی خاصیت ادجوانتی لیپیدهای بکار رفته در آن باید تست های حیواتی انجام شود.

design and synthesis of cationic nisomes and investigation of transfer rate expression of hiv-nef gene in hek293 cell line

human immunodeficiency virus (hiv) is one of the leading causes of death worldwide. the use of antiviral drugs is only able to reduce the annual number of infections by only 18%. there is still no definitive treatment for this disease, so many scientists and research groups are trying to design and produce effective and affordable vaccines for this virus using new methods. the aim of the present study is the design and synthesis of niosomal nanoparticles with adjuvant properties for the transfer of the plasmid containing the nef gene from the hiv virus. due to the unique features of the nef protein, it is widely used in making vaccines against the hiv virus, and many studies have been conducted in this field. but in this research, it is the first time that nisome is used to transfer the nef gene as a vaccine dna. in the present study, niosome nanoparticles were made using the method of making lipid film using rotary, and gel electrophoresis inhibition method was used to measure the amount of dna loading by cationic niosomes. the size and surface charge of niosome nanoparticles and niosome nanoparticles containing plasmid dna were measured using the dls method. hek-293 cell line was used to investigate the efficiency of gene transfer by niosomal nanoparticles into eukaryotic cells, and the amount of gene transfer was measured using flow cytometry and observation of cells containing gfp by fluorescent microscope. mtt test was used to check the toxicity of cationic niosomes made on hek-293 cells and the stability of made nanoparticles was checked in the presence of serum and using dnase enzyme. nisom cation size nm 76.03 and pdl 0. the size and zeta of the neutral nisome is 0. nisome (adjuvant) was treated with different amounts of dna and formed a complex, but the cells were only able to treat amounts of 0.5, 1 and 2 micrograms of dna. transfection (gene transfer to cells) was over 90%. the mtt test also showed no toxicity. the obtained results showed that cationic nisomes, which have a higher positive charge, can carry up to 2 micrograms of dna and are able to transfer genes to eukaryotic cells. animal tests should be performed to check the efficiency of gene transfer by niosomal nanoparticles and to check the adjuvant properties of lipids used in it