جداسازی و شناسایی یک سویه باکتری تولید کننده آنزیم لیپاز قلیایی و بررسی میزان فعالیت آنزیم تولید شده

لیپازها یک زیر رده از استرازها هستند و نقش مهمی در هضم و پردازش لیپیدها در اکثر موجودات زنده دارند. این آنزیم ها معمولا نقش موثری در صنایع مختلف از جمله صنایع غذایی، پردازش چرم، لوازم آرایشی، کاغذ و صنایع شوینده دارند. لیپازها همچنین در توسعه حسگرهای زیستی، تولید بیودیزل و زیست پالایی از اهمیت بالایی برخوردار هستند. در زمان های اخیر، متخصصان زیست فناوری میکروبی توجه خود را به استفاده تجاری از لیپازها با منشا میکروبی معطوف کرده اند و سویه های میکروبی متعددی برای تولید آنزیم غربالگری و شناسایی شده اند. به طور مثال از pseudomonas helmanticensis hs6 و سایر جنس‌های باکتریایی و قارچی برای تولید لیپاز جهت کاربرد در صنعت مواد شوینده و بهینه سازی چربی زدایی چرم گوسفند استفاده شده است. در مطالعه حاضر با هدف جداسازی باکتری تولید کننده آنزیم لیپاز مقاوم به دترجنت، نمونه‌های آب با ph قلیایی و دماهای مختلف از چشمه آب گرم قینرچه در استان اردبیل جمع آوری گشته و در محیط پایه نمکی حاوی روغن زیتون به عنوان منبع کربن کشت داده شدند. پس از 72 ساعت انکوباسیون در دماهای 60 – 25 درجه سانتی گراد، با تهیه سریال رقت و کشت سطحی بر روی پلیت های حاوی محیط تری بوتیرین آگار و بررسی های بیوشیمیایی، سویه های تولید کننده لیپاز جداسازی شدند. به منظور سنجش میزان فعالیت آنزیمی سویه های جدا شده، از سوبسترای pnpp استفاده شد و سویه برتر انتخاب گردید. پس از آنالیزهای پلی فازیک، سویه ی منتخب از جنس serratia شناسایی شد. این سویه فعالیت آنزیمی به میزان u/l 2500 را نشان داد که در بین جدایه‌های دیگر بیشترین میزان فعالیت را داشت و این میزان را می‌توان پس از اعمال بهینه‌سازی بر روی فاکتورهایی مانندph ، دما، منابع مختلف نیتروژن و درصد آن، منابع مختلف کربن روغنی و درصد آن، دور شیکر و میزان تلقیح به میزان قابل توجهی افزایش داد. در مجموع، نتایج این تحقیق نشان می دهد که گونه‌های سراشیای مقیم در چشمه‌های آب گرم، منبعی مهم از لیپازهای قلیایی بوده و کاندیدی مناسب برای استفاده در کاربردهای صنعتی می باشند.

isolation and identification of a bacterial strain producing alkaline lipase enzyme and activity assessment of the produced enzyme

lipases are a subclass of esterases that play an important role in the digestion and processing of lipids in most organisms. these enzymes are used in various fields, including food, leather, cosmetics, paper, and detergent industries. they also have great importance in biosensor development, biodiesel production, and bioremediation. in recent years, microbial biotechnology specialists have turned their attention to the commercial use of microbial lipases, and several microbial strains have been screened and identified for lipase production. for example, pseudomonas helmanticensis hs6 and other bacterial and fungal genera have been employed to produce lipases for use in the detergent industry and to optimize the degreasing of sheep leather. in the present study, with the aim of isolating lipase-producing bacteria, water samples with alkaline ph and different temperatures were collected from the qainarcheh thermal spring in ardabil, iran, and cultivated in a mineral saline base medium containing olive oil, as the carbon source. following the incubation at 25-60ﹾc for 72 h, lipase-producing strains were isolated by preparing serial dilutions and spread on plates containing tributyrin agar medium. to assay the enzymatic activity of the isolated strains, pnpp substrate was used and the most lipase-producing strain was selected. polyphasic analyses showed that this strain belonged to the genus of serratia. this strain showed an enzyme activity of 2500 u/l, which was the highest activity among other isolates. the enzyme activity can be improved after optimizing factors such as ph, temperature, different sources of nitrogen and oily carbon, shaking speed, and inoculation rate. in conclusion, the results of the present study show that serratia spp. are a potential source of alkaline lipases and a proper candidate for industrial applications.