ساخت سازه نوترکیب گلیکوپروتئین e2 ویروس hcv

ویروس هپاتیت c شیوع و گسترش جهانی داشته و یکی از علل اصلی ابتلا به سیروز کبدی و از مهمترین دلایل مرگ و میر در سرتاسر جهان است. در حال حاضر واکسن مناسبی برای پیشگیری از ابتلا به این ویروس وجود ندارد. گلیگوپروتئین e2 یکی از این پروتئین ها است که عامل اصلی در اتصال و ورود به سلول میزبان است. هدف اصلی این مطالعه ساخت سازه بیانی از ژن e2 ویروس هپاتیت c در میزبان باکتریایی بود. به منظور انجام این مطالعه ژن گلیکوپروتئین e2 از سروتیپ a1 از بیماران جداسازی و شناسایی شد. با استفاده از rt-pcr ژن جداسازی شد و در ادامه با استفاده از nested-pcr تکثیر شد. سازه بیانی ژن در وکتور pet21α ساخته شد و به درون باکتری های مستعدe.coli dh5-α انتقال داده و کلنی های حاوی وکتور مدنظر را براساس مقاومت به آمپی سیلین و با استفاده از روش colony pcr انتخاب شد. به منظور آنالیز نهایی و تایید کلونینگ ژن e2 قطعات کلون شده تعیین توالی شد و نتایج تعیین توالی، در پایگاه ncbi بلست شد. نتایج بدست آمده از این مطالعه نشان دهنده صحت مراحل انجام آزمایش و کلون شدن دومین حفاظت شده ژن e2 در وکتور pet21α و بیان این ژن در باکتری e.coli dh5αبود. با توجه به نقش گلیکوپروتئین e2 در اتصال و ورود به سلول و همچنین توان تحریک سیستم ایمنی همورال و سلولی توسط آن، e2 کاندید مناسبی برای مطالعه برای تهیه واکسن است. سازه نوترکیب این مطالعه برای بررسی بیشتر و بررسی ساختار پروتئین و ایمنی زایی باید در مراحل بعدی مورد مطالعه قرار بگیرد.

construction of the recombinant glycoprotein e2 structure of hcv virus

introduction: hepatitis c virus has spread globally and is one of the main causes of liver cirrhosis and death worldwide. currently, there is no suitable vaccine to prevent this virus. glycoprotein e2 of this virus can stimulate the immune system. the main aim of this study was to construct an expression construct of the hepatitis c virus e2 gene in a bacterial host. in this study, glycoprotein e2 gene from serotype a1 was isolated and identified from patients, e2 gene was isolated by using rt-pcr and amplified nested-pcr. the gene expression construct was made in pet21α vector and transferred into competent cells of e. coli dh5-α and colonies containing the desired vector were selected based on ampicillin resistance and using the colony pcr method. for final analysis of e2 gene cloning, the cloned fragments were sequenced and the sequencing results were blasted in the ncbi database. the results obtained from this study showed the correctness of the testing and cloning of the second protected e2 gene in pet21α vector and the expression of this gene in e. coli dh5α bacteria. considering the role of glycoprotein e2 in binding and entering the cell, as well as its ability to stimulate the humoral and cellular immune system, e2 is a good candidate to study for the preparation of a vaccine. the recombinant structure of this study should be studied in the next steps for further investigation and investigation of protein structure and immunogenicity