جداسازی و شناسایی باکتری های مولد آنزیم هیالورونیداز و بهینه سازی تولید توسط روش آماری تاگوچی

هیالورونیداز نوعی آنزیم گلوکوزیداز می باشد و عامل شکسته شدن مولکول های اسید هیالورونیک است. یکی از منابع تولید این آنزیم باکتری ها هستند که در این تحقیق از منابع مختلفی از جمله نمونه های آب، خاک و هوا نمونه برداری شد. در مجموع 26 سویه تولید کننده آنزیم جدا سازی شدند. به منظور غربالگری سویه های تولید کننده این آنزیم از محیط کشت bhi آگار استفاده شد. پس از اتوکلاو شدن به آن محلول سدیم فسفات به همراه هیالورونیک اسید و سرم آلبومین گاوی اضافه شد و در پلیت ها توزیع گردید. پس از بررسی های کمی، به بررسی کیفی آنزیم تولیدی توسط روش کربازول پرداخته شد. در روش کربازول که بر پایه میزان جذب نوری می باشد از دو محلول استفاده می شود که محلول شماره یک حاوی اسید سولفوریک و سدیم تتراهیدروبورات بود و محلول شماره دو حاوی اتانول و کربازول بود. پس از طی مراحل بررسی های کیفی 2 سویه که بیشترین میزان تولید آنزیم را داشتند انتخاب شدند و در نهایت توسط آزمون آماری چند فاکتوره تاگوچی منابع نیتروژن و منابع کربن مختلف و همزمان شرایط مختلفی مثل میزان phو دما بررسی گردید و برهمکنش کلیه ی شرایط گفته شده توسط نرم افزار بررسی و آزمایشاتی را نرم افزار به ما داد سپس با انجام آزمایشات و دریافت پاسخ آنها و انتقال به محیط نرم افزار، نرم افزار به ما نمودار هایی ارائه داد که با بررسی این نمودار ها به بیشترین میزان تولید آنزیم رسیدیم.

isolation and identification of bacteria producing hyaluronidase enzyme and optimization of production by taguchi's statistical method

hyaluronidase is a type of glucosidase enzyme and is responsible for breaking hyaluronic acid molecules. one of the sources of the production of this enzyme are bacteria, which were sampled from various sources such as water, soil and air samples in this research. a total of 26 enzyme producing strains were isolated. in order to screen the strains producing this enzyme, bhi agar culture medium was used. after autoclaving, sodium phosphate solution along with hyaluronic acid and bovine serum albumin was added to it and distributed in plates. after quantitative studies, the quality of the enzyme produced by the carbazole method was investigated. in the carbazole method, which is based on the amount of light absorption, two solutions are used, solution number one contains sulfuric acid and sodium tetrahydroborate, and solution number two contains ethanol and carbazole. after going through the stages of qualitative investigations, 2 strains that had the highest amount of enzyme production were selected, and finally, using taguchi s multi-factorial statistical test, different nitrogen sources and different carbon sources and simultaneously different conditions such as ph and temperature were investigated and the interaction of all said conditions was investigated. through the software, the software gave us some tests and tests, then by doing the tests and receiving their answers and transferring them to the software environment, the software presented us with graphs, and by checking these graphs, we reached the highest amount of enzyme production.