کلون سازی ، بیان وتخلیص پروتئین کایمریک متشکل از نواحی آنتی ژنیک پروتئین های ureb,flidوomp18 و ارزیابی پتانسیل آن درتشخیص سرولوژیک عفونت هلیکوباکتر پیلوری

هلیکوباکتر پیلوری به عنوان عامل عفونت‌های مزمن گوارشی شناخته شده است. تست سرولوژیکی یک روش تشخیصی این عفونت در دسترس می‌باشد هدف از این مطالعه طراحی، کلون سازی و بیان پروتئین نوترکیب حاصل از دو ژنureb و omp18 از سویه بومی ایرانی می‌باشد که می‌تواند در طراحی کیت سرولوژیکی جهت تشخیص این عفونت به کار رود. پس از استخراج dna از هلیکوباکتر پیلوری، ژن های ureb وomp18 توسط پرایمرهای طراحی شده با واکنش pcr تکثیر شده و بعد از برش آنزیمی در وکتور بیانی pet-22b کلون گردید. بیان پروتئین نوترکیب حاصل با کمک iptg القا گردید و با روش افینیتی کروماتوگرافی تخلیص شد. خاصیت آنتی ژنی پروتئین نوترکیب تخلیص شده با روش وسترن بلاتینگ. تایید گردید. در این مطالعه، دو قطعه‌ی ژنی ureb، و omp18 به ترتیب با سایزهای 597 و 479 جفت باز توسط pcr تکثیر یافته و به شکل یک قطعه‌ی هیبرید در وکتور pet-22b کلون گردید. بیان پروتئین نوترکیب حاصل در باکتری e. coli bl21(de3) به شکل یک قطعه‌ی حدود 60 کیلودالتونی در sds-page ظاهر گردیده و توسط ستون ni-nta تخلیص شد. نتایج وسترن بلات آنتی‌ژن کایمریک تخلیص شده با سرم بیماران مبتلا به هلیکوباکتر پیلوری نشان دهنده ویژگی آنتی‌ژنی پروتئین نوترکیب حاصل بود. در مطالعه‌ی حاضر برای اولین بار پروتئین نوترکیب ,ureb- omp18 از سویه ی بومی هیلوکوباکتر پیلوری تولید گردید که می‌تواند کاندیدای مناسبی جهت طراحی کیت تشخیصی هلیکوباکتر پیلوری در منطقه باشد.

cloning, expression and purification of chimeric proteins comprising antigenic regions of flid, ureb and omp18 proteins and evaluation of its applicative potential for serodiagnosis of helicobacter pylori infection

helicobacter pylori (h. pylori) infection is accepted as the primary cause of chronic gastritis. among the diagnostic methods of h. pylori infection, serological tests as an antibody-based method are widely available and relatively sensitive to detect h. pylori infection. however, the low specificity limits its application. the present study was aimed for designing, cloning and expression of ureb - omp18 protein from iranian h. pylori strains. after extraction of genomic dna from focal helicobacter pylori strain, ureb and omp18 genes were amplified by primers designed for these genes by pcr reaction and cloned into pet-22b expression vector after enzymatic cleavage. the expression of the resulting recombinant protein was induced by iptg and purified with high purity by affinity chromatography. the antigenic properties of the purified recombinant protein were confirmed by western blotting. in this study, two ureb andomp18 gene fragments were amplified by pcr as 597 and 479 bp fragments, respectively, and cloned as a hybrid fragment in the pet-22b vector. the expression of the recombinant protein in e. coli bl21 (de3) appeared as a fragment of about 60 kda on sds-page and was purified by ni-nta column. western blot results of purified chimeric antigen with sera of h. pylori infected patients showed the antigenic properties of the recombinant protein. in the present study, for the first time, the recombinant ureb-omp18 protein was produced from the native strain of helicobacter pylori, which can be a suitable candidate for designing a helicobacter pylori diagnostic kit in the region.